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在植物學領域頂刊Molecular Plant、Nature Plants上發(fā)表論文,這個實驗室總結植物活性成分檢測!

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植物活性成分是指構成植物體內(nèi)的物質(zhì)中,除水分、糖類、蛋白質(zhì)類、脂肪類等必要營養(yǎng)物質(zhì)外,還包括的次生代謝產(chǎn)物,如萜類、黃酮、生物堿、甾體、木質(zhì)素、礦物質(zhì)等。這些物質(zhì)對人類以及各種生物具有生理促進作用,因此被稱為植物活性成分。下面,就和小普一起來了解一下吧!

一、植物中主要富含的活性物質(zhì)及功能

植物在大自然界中扮演主要的角色,因其富含多種生物活性物質(zhì)而備受關注。這些活性物質(zhì)按照化學結構和功能特性可分為多個主要類別,每種類別都具有獨特的生理活性和健康功效。

  • 1.酚酸類是一類含有酚羥基和羧基的有機化合物,是植物中廣泛存在的一類重要活性成分。它們屬于水溶性成分,具有酚羥基和羧基的雙重結構特征,如咖啡酸、綠原酸和阿魏酸等,在植物中含量豐富,具有顯著的抗氧化活性[1]。

  • 2.黃酮類化合物是一類重要的植物多酚類次級代謝產(chǎn)物,具有C6-C3-C6的基本碳架結構。它們廣泛分布于植物的根、莖、葉、花和果實中,是植物中廣泛存在的一類生物活性成分,如槲皮素、山奈酚和楊梅素等,能夠清除自由基,抑制氧化應激反應,對預防心血管疾病、癌癥和抗衰老具有積極作用[2]。

  • 3.生物堿是一類在自然界中廣泛存在的重要次級代謝產(chǎn)物,它們是由氨基酸或轉(zhuǎn)氨基作用衍生而來的復雜化合物。生物堿通常含有氮原子,具有顯著的生理活性,是中草藥成分中極為重要的一類,具有相當強烈的藥理效應。

  • 4.萜類是一類廣泛存在于自然界中的化學成分,主要來源于植物、真菌、昆蟲、海洋生物、植物病原體、動物和內(nèi)生菌等。這些化合物具有從簡單到復雜的結構,主要來源于異戊二烯二磷酸(IPP)、二甲基烯丙基二磷酸(DMAPP)、甲羥戊酸和脫氧木酮糖生物合成途徑,如茯苓酸、皂皮酸和山楂酸等,有研究表明,牡荊素、異葒草素、熊果酸、山楂酸等成分以及山楂提取物可以有效調(diào)節(jié)癌癥相關的信號通路,通過多種機制發(fā)揮抗癌作用[5]。

此外,蔬菜、水果中還含有豐富的礦物質(zhì)元素如鉀、鎂、鈣、鋅等,這些礦物質(zhì)參與多種生理過程,對維持人體電解質(zhì)平衡和酶活性具有重要作用。


圖.植物中的活性物質(zhì)。

二、植物活性成分的檢測方法

植物功能性食品的活性成分檢測方法多樣化,主要包括物理化學分析、生物活性評價和代謝組學分析等幾大類。物理化學分析方法是檢測活性成分的基礎,主要包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(GC-MS)等現(xiàn)代分析儀器。這些方法能夠?qū)χ参镏卸喾宇?、黃酮類、酚酸類等活性成分進行定性和定量分析,確保功能性食品中活性成分的準確識別和含量測定。特別是高分辨率檢測技術,在植物功能性食品開發(fā)過程中發(fā)揮著決定性作用。植物活性成分的檢測方法近年來發(fā)展迅速,形成了多種技術手段相結合的綜合分析體系。以下是當前主流的檢測方法:

(1)色譜分析法

色譜技術是植物活性成分檢測的基礎方法。高效液相色譜法(HPLC)因其高分辨率和高靈敏度被廣泛應用,能夠同時檢測多種活性成分。超高效液相色譜(UPLC)進一步提高了分析速度和分離效率,能夠在更短時間內(nèi)完成復雜樣品的分析[6]。氣相色譜(GC)則主要用于揮發(fā)性成分的檢測,如精油中的萜類化合物。

(2)光譜分析法

紫外-可見分光光度法因其操作簡便、成本低廉而被廣泛用于總酚、總黃酮等活性成分的快速測定。紅外光譜(IR)和拉曼光譜可用于活性成分的結構鑒定和指紋圖譜分析。核磁共振(NMR)技術能夠提供分子的詳細結構信息,在活性成分鑒定中發(fā)揮重要作用。

(3)質(zhì)譜分析法

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(LC-MS)是目前植物活性成分分析的主流技術之一,能夠同時實現(xiàn)定性和定量分析。三重四極桿質(zhì)譜(QQQ)具有高靈敏度和選擇性,適用于微量成分的檢測。高分辨質(zhì)譜如Orbitrap和TOF能夠精確測定分子量,為活性成分的結構鑒定提供準確數(shù)據(jù)[7]。

植物功能性食品活性成分的檢測方法需要綜合運用多種技術手段,從成分分析、活性評價到代謝研究,全面評估活性成分的含量、功效和生物利用度。這些檢測方法的不斷發(fā)展和完善,為植物功能性食品的開發(fā)和質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)和技術支持。

三、文獻分享

漿果及其活性成分在預防老年性黃斑變性預防中的作用


期刊名稱:Antioxidants

影響因子:6.6

DOI:https://doi.org/10.3390/antiox13121558

1.研究內(nèi)容

年齡相關性黃斑變性(AMD)是老年人視力喪失的主要原因,目前尚無逆轉(zhuǎn)視網(wǎng)膜變性的治療方法,因此干預措施重在延緩病程。漿果富含黃酮類、花青素、類胡蘿卜素和白藜蘆醇等生物活性物質(zhì),具有抗氧化、抗炎和抗血管生成特性。本文綜述了動物實驗和臨床研究結果,總結了已被證實可預防或延緩AMD進展的漿果,以及具有潛在治療價值的漿果,并分析了其中關鍵植物化學物的作用機制及應用特性。

2.研究結果

(一)視網(wǎng)膜相關性黃斑變性的定義和分類

視網(wǎng)膜相關性黃斑變性(AMD)占全球所有失明的87%,是發(fā)達國家最常見的致盲原因,特別是在60歲及以上的人群中。AMD仍然是一個重大的公共衛(wèi)生問題,預計到2040年患病人數(shù)將達2.88億。其發(fā)病機制涉及氧化應激、慢性炎癥和脂質(zhì)代謝失調(diào)。AMD分為兩型:干性(萎縮性)進展緩慢,因玻璃疣積累和地圖狀萎縮導致中心視力逐漸喪失;濕性(新生血管性)進展快、視力損傷嚴重,由異常血管生長和滲漏引起。由于神經(jīng)退行性過程不可逆,早期檢測和干預對保護視力至關重要。

(二)視網(wǎng)膜相關性黃斑變性的致病機制

氧化應激是AMD的主要原因之一,會導致在視網(wǎng)膜層內(nèi)形成玻璃狀蛋白脂蛋白和炎性沉積物。隨玻璃疣增大、增多,病情進展至早期或中期AMD。地圖狀萎縮(GA)表現(xiàn)為視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞、光感受器和脈絡膜毛細血管變性,見于晚期AMD。玻璃疣和色素沉著異常是疾病進展的關鍵指標。晚期AMD可發(fā)展為脈絡膜新生血管(CNV),導致濕性AMD,異常血管引發(fā)瘢痕和滲漏,造成嚴重視力喪失。(圖1)。


圖1.年齡相關性黃斑變性(AMD)的病理生理學機制。

(三)漿果中的活性物質(zhì)及在AMD中的保護機制

盡管目前除藍光防護外,缺乏有效的措施來治愈早期年齡相關性黃斑變性(AMD),但人們對飲食干預的興趣日益增加。例如,據(jù)報道,地中海式飲食與晚期AMD進展風險降低相關,其主要成分包括礦物質(zhì)、維生素、ω-3脂肪酸和類胡蘿卜素。漿果,包括藍莓,蔓越莓,醋栗,烏藨子和黑莓,是一組廣泛的藍色,紫色或紅色小尺寸和高度易腐的水果,富含植物化學物質(zhì),如花青素,類黃酮,類胡蘿卜素和白藜蘆醇(圖2)。這些化合物因其健康益處而獲得顯著關注,特別是在預防和管理慢性疾病,包括糖尿病、肥胖和高血壓方面。


圖2.漿果及其具有潛在治療作用的植物化合物。

①黃酮類

黃酮類是漿果中主要的多酚亞類,涵蓋黃酮醇、黃烷醇、異黃酮等。它們通過激活Nrf2信號通路上調(diào)HO-1、SOD、GSH等抗氧化酶,減輕視網(wǎng)膜氧化應激;同時調(diào)節(jié)PI3K/AKT通路,影響B(tài)ax、Bcl-2和caspase-3等凋亡相關蛋白,從而抑制視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞凋亡。此外,黃酮類還能抑制TLR4/NF-κB和MAPK通路,發(fā)揮抗炎作用,這些機制共同有助于減緩AMD的進展。


圖3.植物化學物質(zhì)在減緩年齡相關性黃斑變性(AMD)進展中所采用的保護機制。

②花青素

花青素是黃酮類的特定子類,賦予藍莓、越橘等漿果鮮艷的紅藍紫色。它們具有強大的清除活性氧(ROS)能力,保護視網(wǎng)膜細胞完整性;通過抑制MAPK通路(包括ERK1/2和p38)并激活PI3K/Akt通路,增強細胞的抗氧化防御。同時,花青素減少促炎細胞因子如白細胞介素和腫瘤壞死因子-α的表達,從而減輕慢性炎癥導致的視網(wǎng)膜損傷,使其在AMD預防和管理中特別有益。

③類胡蘿卜素

類胡蘿卜素是漿果中另一類重要色素,人體無法合成,必須通過飲食攝取。其中葉黃素和玉米黃質(zhì)集中于視網(wǎng)膜黃斑區(qū),能吸收有害藍光、減少光化學損傷,并作為局部抗氧化劑降低脂褐素形成。它們還通過抑制NF-κB和MAPK通路的激活,減輕視網(wǎng)膜炎癥。β-胡蘿卜素則作為維生素A前體,對視力維持至關重要。這些特性使類胡蘿卜素在保護黃斑、降低AMD風險方面發(fā)揮核心作用。

④白藜蘆醇

白藜蘆醇是一種二苯乙烯類天然酚化合物,主要存在于葡萄、藍莓等漿果果皮中。它通過增強線粒體生物能量學減少活性氧生成,并激活SIRT1(一種調(diào)節(jié)細胞應激反應和修復的組蛋白去乙?;福瑥亩Wo人視網(wǎng)膜色素上皮細胞免受UVA誘導的損傷。盡管白藜蘆醇在心血管、神經(jīng)保護和抗衰老領域研究廣泛,但其在AMD臨床結局中的具體益處仍相對未被探索,需要進一步研究其藥代動力學特性和長期安全性。

(四)不同漿果的實驗和臨床研究

近年來,越來越多的流行病學和臨床研究強調(diào)了漿果對各種非傳染性慢性疾病的保護作用,如心血管疾病,糖尿病和神經(jīng)退行性疾病。漿果的消費與全因死亡率的降低有關。此外,通過食用富含抗氧化劑的食物、膳食補充劑和保護眼睛健康的營養(yǎng)食譜,可以潛在地減輕發(fā)生年齡相關性黃斑變性(AMD)的風險。文獻中的可用數(shù)據(jù)也支持漿果在AMD中的潛在作用,其中含有在這些補充劑和飲食模式中起關鍵作用的元素。

①越橘,Vaccinium myrtillusL.

越橘富含花青素,傳統(tǒng)上用于維護眼睛健康。臨床前研究表明,越橘提取物能增強玻璃膜疣中β-淀粉樣蛋白沉積的清除,抑制STAT3和NF-κB的激活,從而減輕視網(wǎng)膜炎癥和感光細胞損傷。在內(nèi)毒素誘導的葡萄膜炎模型中,越橘還能減少視紫紅質(zhì)耗竭并防止感光細胞外節(jié)縮短。此外,臨床試驗提示越橘提取物有助于緩解眼睛疲勞,但直接針對AMD進展的證據(jù)仍較為有限。

②黑澀石楠,Aronia melanocarpa

黑澀石楠含有高濃度的花青素苷,具有突出的抗氧化能力。動物實驗顯示,黑澀石楠果實提取物可保護視網(wǎng)膜免受碘酸鈉誘導的退行性損傷,顯著改善晶狀體蛋白的表達,從而維持視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的穩(wěn)定性。與益生菌發(fā)酵乳桿菌NS9聯(lián)合使用可進一步恢復微生物群平衡,協(xié)同增強保護效果。同時,黑澀石楠通過抑制iNOS和COX-2,減少NO、PGE2和TNF-α等炎癥介質(zhì),在內(nèi)毒素誘導的葡萄膜炎模型中呈劑量依賴性地減輕炎癥,顯示出作為抗炎劑治療炎癥性眼病的潛力。

③枸杞,Lycium barbarumL.

枸杞富含葉黃素、玉米黃質(zhì)(以二酯形式存在,生物利用度較高)、多糖及甜菜堿。隨機試驗表明,每日溫水食用約15克枸杞可提供約3毫克玉米黃質(zhì),顯著提高黃斑色素光密度(MPOD),這與降低AMD風險密切相關。枸杞還通過調(diào)節(jié)線粒體功能、抑制炎癥與凋亡、抗氧化及抑制神經(jīng)元退行性變等多種機制,在視網(wǎng)膜色素變性模型中顯示出神經(jīng)保護作用,能夠減緩視網(wǎng)膜退變。然而,目前關于枸杞與AMD的直接臨床研究仍然相當有限。

表1.枸杞動物實驗和功能總結。


④黑醋栗,Ribes nigrumL.

黑醋栗主要含有飛燕草素-3-蕓香糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷等花青素。體外研究發(fā)現(xiàn),黑醋栗提取物能有效抑制ARPE-19細胞中有毒代謝物A2E的積累,并恢復超氧化物歧化酶1(SOD1)的表達,從而保護視網(wǎng)膜色素上皮細胞免受藍光損傷。此外,黑醋栗可促進視紫紅質(zhì)再生,對弱光視覺有益。在一項隨機、雙盲、安慰劑對照臨床試驗中,含有黑醋栗、枸杞、菊花等成分的植物配方在45天和90天后均顯著提高了受試者的黃斑色素光密度,但尚未有研究直接評估黑醋栗對AMD進展的影響。

表2.漿果植物化學物在年齡相關性黃斑變性中的實驗與臨床研究。


漿果富含多種抗氧化植物化學物質(zhì),如花青素,類黃酮,類胡蘿卜素和白藜蘆醇,在預防和管理年齡相關性黃斑變性(AMD)方面表現(xiàn)出很大的潛力,但當前仍面臨重大挑戰(zhàn)。許多漿果來源的植物代謝物生物利用度較低,嚴重限制了其在體內(nèi)的實際效果。除越橘、枸杞等少數(shù)漿果外,藍莓、紅莓、葡萄、柿子、鵝莓、酸櫻桃等漿果雖然在動物實驗中表現(xiàn)出抗氧化、抗炎、抗菌或抗衰老特性,但缺乏針對AMD的嚴格臨床試驗驗證。未來需要更多臨床研究來證實這些漿果在AMD預防和管理中的功效,并探索提高生物利用度的策略,如劑型改進或聯(lián)合用藥。

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參考文獻:

[1] Ng TK, Chu KO, Wang CC, et al. Green Tea Catechins as Therapeutic Antioxidants for Glaucoma Treatment. Antioxidants (Basel). 2023;12 (7):. doi:10.3390/antiox12071320.

[2] Bangar SP, Chaudhary V, Sharma N, et al. Kaempferol: A flavonoid with wider biological activities and its applications. Crit Rev Food Sci Nutr. 2023;63 (28):9580-9604. doi:10.1080/10408398.2022.2067121.

[3] Peng Y, Yan Y, Wan P, et al. Gut microbiota modulation and anti-inflammatory properties of anthocyanins from the fruits of Lycium ruthenicum Murray in dextran sodium sulfate-induced colitis in mice. Free Radic Biol Med. 2019;136:96-108. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2019.04.005.

[4] Samanta S. Potential Bioactive Components and Health Promotional Benefits of Tea (Camellia sinensis). J Am Nutr Assoc. 2022;41 (1):65-93. doi:10.1080/07315724.2020.1827082.

[5] Zhou Z,Nan Y,Li X, et al. Hawthorn with "homology of medicine and food": a review of anticancer effects and mechanisms. Front Pharmacol. 2024;15:1384189. doi:10.3389/fphar.2024.1384189.

[6] Arrizabalaga-Larra?aga A, Epigmenio-Chamú S, Santos FJ, et al. Determination of banned dyes in red spices by ultra-high-performance liquid chromatography-atmospheric pressure ionization-tandem mass spectrometry. Anal Chim Acta. 2021;1164:338519. doi:10.1016/j.aca.2021.338519.

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?(一)植物檢測指標



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(實驗室部分拍攝)


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