養(yǎng)殖系統(tǒng)中過(guò)量的有機(jī)物為機(jī)會(huì)性病原體提供了絕佳的生長(zhǎng)條件，而有益細(xì)菌可通過(guò)分解有機(jī)物，有效降低疾病爆發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。

細(xì)菌病一直是水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的重大威脅。大多數(shù)致病細(xì)菌本質(zhì)上屬于機(jī)會(huì)性病原體，廣泛存在于人體表面的自然微生物群、動(dòng)物腸道、水生環(huán)境及養(yǎng)殖池底中。在水質(zhì)、動(dòng)物健康狀態(tài)及微生物群結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定的情況下，這些病原體引發(fā)疾病的概率極低；但當(dāng)環(huán)境出現(xiàn)波動(dòng)、水質(zhì)惡化或動(dòng)物健康受損時(shí)，機(jī)會(huì)性致病條件會(huì)迅速形成，病原體密度快速升高，進(jìn)而誘發(fā)傳染病。因此，病原細(xì)菌的有效控制，與穩(wěn)定養(yǎng)殖環(huán)境、實(shí)施高效水質(zhì)管理密不可分。

池塘的科學(xué)合理管理是防控細(xì)菌病的關(guān)鍵。除此之外，疫苗接種和抗生素應(yīng)用也是常用防控措施，但二者均存在諸多局限性。疫苗并非適用于所有養(yǎng)殖物種和所有細(xì)菌病，且主要對(duì)病毒性疾病效果顯著，對(duì)蝦類等水產(chǎn)養(yǎng)殖品種幾乎不適用。同時(shí)，疫苗的防控效果還受多種因素影響，包括養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫狀態(tài)、體型大小、疫苗劑量與配方、使用方式及治療方案等。此外，疫苗接種成本高昂、勞動(dòng)強(qiáng)度大，還可能給養(yǎng)殖動(dòng)物帶來(lái)應(yīng)激反應(yīng)。

過(guò)去，抗生素常被用于畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和預(yù)防疾病。然而，抗生素的濫用與失控，加劇了耐藥細(xì)菌的滋生與擴(kuò)散。長(zhǎng)期的抗生素選擇壓力，不僅增加了病原體的治療難度，還導(dǎo)致耐藥菌株向環(huán)境中廣泛傳播，因此，將抗生素作為疾病預(yù)防手段的應(yīng)用方式，如今已越來(lái)越具爭(zhēng)議性。

目前，科研人員已開(kāi)發(fā)出多種替代方案，用于改善養(yǎng)殖動(dòng)物健康、優(yōu)化水質(zhì)并有效控制病原體，其中，添加有益細(xì)菌（即益生菌）被認(rèn)為是最具可持續(xù)性的發(fā)展方向，其能夠幫助維持養(yǎng)殖環(huán)境穩(wěn)定，抑制機(jī)會(huì)性病原體的生長(zhǎng)繁殖。

一、水質(zhì)管理：

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中，水生物種會(huì)持續(xù)向水體中排放糞便、尿液及殘餌。隨著這些有機(jī)物的不斷積累，水體中有毒化合物的濃度會(huì)逐漸升高，進(jìn)而導(dǎo)致水質(zhì)惡化。因此，去除水體中的過(guò)量有機(jī)物和有毒物質(zhì)，是維持養(yǎng)殖環(huán)境穩(wěn)定的關(guān)鍵。細(xì)菌在這一過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，利用植物或微生物（如細(xì)菌）處理養(yǎng)殖廢棄物的方式，被稱為生物修復(fù)。

過(guò)量有機(jī)物不僅會(huì)惡化水質(zhì)，還會(huì)為病原體的滋生創(chuàng)造有利條件，顯著增加疾病爆發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。與之相反，芽孢桿菌等有益細(xì)菌能夠有效分解水體中的有機(jī)物，降低環(huán)境污染壓力，助力維持池塘生態(tài)系統(tǒng)的平衡穩(wěn)定。

此外，氨、亞硝酸鹽、硝酸鹽等含氮化合物，主要通過(guò)養(yǎng)殖廢棄物分解和養(yǎng)殖動(dòng)物排泄物降解形成。當(dāng)這些含氮化合物的濃度超過(guò)安全閾值時(shí)，會(huì)對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物產(chǎn)生毒性：氨可引發(fā)養(yǎng)殖動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)疾病；高濃度亞硝酸鹽會(huì)降低動(dòng)物血液的氧氣運(yùn)輸能力，導(dǎo)致其長(zhǎng)期處于“窒息”狀態(tài)；硝酸鹽毒性雖相對(duì)較低，但長(zhǎng)期暴露會(huì)導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)遲緩、抵抗力下降，進(jìn)而更易感染疾病。

為降低養(yǎng)殖系統(tǒng)的管理復(fù)雜度，添加有益細(xì)菌是必要的解決方案。這些益生菌可參與水體中的硝化和/或反硝化過(guò)程（見(jiàn)圖1、圖2），從而有效降低水中氨、亞硝酸鹽和硝酸鹽的濃度。具體而言，硝化作用是指細(xì)菌以羥胺、亞硝酸鹽等為中間體，將氨氧化為硝酸鹽的過(guò)程；反硝化作用則是將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氮氧化物，最終轉(zhuǎn)化為氮?dú)獠⑨尫诺酱髿庵械倪^(guò)程。亞硝酸鹽在這兩個(gè)過(guò)程中均扮演著中間體的角色。因此，若要高效處理水體中的氨、亞硝酸鹽和硝酸鹽，將具有硝化能力和反硝化能力的細(xì)菌菌株聯(lián)合使用，可獲得最佳處理效果。

圖1：細(xì)菌的硝化與反硝化過(guò)程

圖2：體外氮化合物的生物處理效果。實(shí)驗(yàn)室條件下，將細(xì)菌細(xì)胞分別置于高濃度氨、硝酸鹽或亞硝酸鹽環(huán)境中，培養(yǎng)兩天后觀察處理效果。

含硫化合物，尤其是硫化氫（H?S），是池塘養(yǎng)殖中需重點(diǎn)關(guān)注的有毒物質(zhì)。硫化氫氣體由池底有機(jī)物在厭氧條件下分解產(chǎn)生，其存在會(huì)抑制養(yǎng)殖動(dòng)物的有氧呼吸，使其易受缺氧影響，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致窒息死亡。池底出現(xiàn)黑色污泥，是硫化氫存在的典型特征——該黑色污泥由硫化氫與水體中的鐵離子反應(yīng)生成硫化鐵形成。

不過(guò)，部分細(xì)菌能夠利用并代謝硫化氫，其中最具代表性的包括硫桿菌屬（Thiobacillus）和副球菌屬（Paracoccus）等。例如，硫桿菌可通過(guò)脫硝化作用和硫氧化作用，同時(shí)去除水體中的硝酸鹽和硫化氫，將這兩種有毒化合物分別轉(zhuǎn)化為無(wú)毒的硫酸鹽和氮?dú)猓瑥亩行Ц纳瞥靥琉B(yǎng)殖環(huán)境質(zhì)量。

二、有益細(xì)菌與致病細(xì)菌的區(qū)別：

抑制病原體生長(zhǎng)的能力，是益生菌的核心評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)之一。通常情況下，益生菌通過(guò)排他性競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制發(fā)揮抑菌作用，其表現(xiàn)形式多樣，包括：產(chǎn)生細(xì)菌素等抗菌化合物；分泌有機(jī)酸，降低胃腸道或水體環(huán)境的pH值，從而抑制有害細(xì)菌生長(zhǎng)；與致病細(xì)菌爭(zhēng)奪附著位點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)資源等。

近年來(lái)，一種新型病原體控制方法受到廣泛關(guān)注，即通過(guò)破壞細(xì)菌細(xì)胞間的群體感應(yīng)（QS）機(jī)制，實(shí)現(xiàn)對(duì)致病細(xì)菌的抑制。

根據(jù)微生物學(xué)理論，群體感應(yīng)是細(xì)菌根據(jù)種群密度調(diào)節(jié)自身基因表達(dá)的過(guò)程，該機(jī)制通過(guò)細(xì)菌持續(xù)分泌的小分子信號(hào)物質(zhì)實(shí)現(xiàn)。隨著細(xì)菌種群數(shù)量的增加，這些信號(hào)物質(zhì)在環(huán)境中不斷積累，當(dāng)達(dá)到一定濃度閾值時(shí)，會(huì)觸發(fā)細(xì)菌群體的基因表達(dá)發(fā)生協(xié)同變化。

群體感應(yīng)機(jī)制可幫助細(xì)菌群體協(xié)調(diào)開(kāi)展群體活動(dòng)，例如生物膜的形成、毒力因子的增強(qiáng)表達(dá)，以及抗菌劑和胞外酶的分泌等。但這些群體活動(dòng)需要消耗大量代謝能量，因此，只有當(dāng)細(xì)菌群體數(shù)量足夠多、活動(dòng)成功概率較高時(shí)，才會(huì)通過(guò)群體感應(yīng)觸發(fā)這些活動(dòng)。其中，毒力因子的及時(shí)、高效表達(dá)，是致病細(xì)菌成功引發(fā)感染的關(guān)鍵。

科研人員已發(fā)現(xiàn)并分離出多種不同類型的群體感應(yīng)信號(hào)分子，其中最常見(jiàn)的是革蘭氏陰性菌中的酰基化高絲氨酸內(nèi)酯（AHL）和革蘭氏陽(yáng)性菌中的小分子多肽。AHL分子碳鏈長(zhǎng)度的差異，賦予了其物種特異性；此外，無(wú)論細(xì)菌屬于革蘭氏陽(yáng)性還是革蘭氏陰性，許多物種都能產(chǎn)生、識(shí)別并響應(yīng)通用信號(hào)分子AI-2。

弧菌屬等致病細(xì)菌，會(huì)利用物種特異性的信號(hào)分子進(jìn)行細(xì)胞間通訊。這些信號(hào)分子如同細(xì)菌的“交流語(yǔ)言”，幫助其感知環(huán)境條件、周圍物種組成、營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)狀態(tài)以及整個(gè)種群的代謝水平。

基礎(chǔ)的AHL信號(hào)系統(tǒng)，由負(fù)責(zé)合成AHL的酶和識(shí)別該信號(hào)分子的轉(zhuǎn)錄因子組成（見(jiàn)圖3）。當(dāng)AHL與受體結(jié)合后，會(huì)激活或抑制目標(biāo)基因的表達(dá)。而在弧菌屬中，存在更為復(fù)雜的多信號(hào)系統(tǒng)：不同的信號(hào)分子被細(xì)胞膜上的特異性受體識(shí)別后，會(huì)激活共同的調(diào)控通路，進(jìn)而控制基因表達(dá)。每個(gè)信號(hào)分子都通過(guò)自身的“傳導(dǎo)通道”發(fā)揮作用，最終整合到同一信號(hào)傳輸系統(tǒng)中，實(shí)現(xiàn)群體行為的協(xié)同調(diào)控。

圖3：革蘭氏陰性菌的群體感應(yīng)（密度誘導(dǎo)）機(jī)制

三、群體感應(yīng)的抑制（淬滅）：

當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞間的通訊機(jī)制被破壞時(shí)，其群體內(nèi)的協(xié)同活動(dòng)將無(wú)法維持，由群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控的各項(xiàng)特性（如毒力表達(dá)、生物膜形成）也無(wú)法正常實(shí)現(xiàn)。在水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)景中，抑制群體感應(yīng)可有效降低致病細(xì)菌的毒力，使其更易被環(huán)境因素或養(yǎng)殖動(dòng)物自身免疫系統(tǒng)影響，從而達(dá)到防控疾病的目的。

“群體感應(yīng)淬滅”過(guò)程可作用于群體感應(yīng)系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)（見(jiàn)圖3）：若信號(hào)分子的合成被阻斷，細(xì)菌細(xì)胞將無(wú)法產(chǎn)生通訊信號(hào)，進(jìn)入“靜默”狀態(tài)；若針對(duì)信號(hào)檢測(cè)環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，會(huì)破壞受體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，或通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合受體位點(diǎn)，使信號(hào)分子無(wú)法激活受體；此外，信號(hào)分子還可能被特定酶類分解，導(dǎo)致通訊信息無(wú)法傳遞至接收細(xì)胞，從而中斷群體感應(yīng)。

在自然界中，植物、細(xì)菌和藻類已進(jìn)化出多種抑制微生物群體感應(yīng)的機(jī)制，以調(diào)控微生物活動(dòng)。例如，大蒜中含有的特定化合物可干擾細(xì)菌間的信號(hào)傳遞；紅藻Delisea pulchra能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)與AHL相似的鹵代呋喃酮類化合物，通過(guò)“欺騙”致病細(xì)菌，使其信號(hào)分子無(wú)法正常結(jié)合受體，從而阻斷群體感應(yīng)。

此外，細(xì)菌自身也進(jìn)化出分解AHL信號(hào)分子的機(jī)制——這是細(xì)菌間競(jìng)爭(zhēng)與通訊調(diào)控的重要方式。部分芽孢桿菌物種可分泌特定酶類，破壞AHL分子的內(nèi)酯環(huán)，使其失去信號(hào)活性；而羅爾斯頓菌屬（Ralstonia）、貪噬菌屬（Variovorax）等物種則會(huì)攻擊AHL分子的酰胺鍵，使其降解。由此可見(jiàn)，有益細(xì)菌不僅能通過(guò)產(chǎn)生抗菌劑直接抑制病原體，還能通過(guò)干擾其群體感應(yīng)通訊，實(shí)現(xiàn)對(duì)病原體爆發(fā)的有效控制與限制。

四、群體感應(yīng)信號(hào)抑制實(shí)例：

過(guò)去幾十年間，科研人員開(kāi)發(fā)出多種指示性細(xì)菌菌株，這類菌株在檢測(cè)到群體感應(yīng)信號(hào)分子時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出發(fā)光、熒光或色素沉著等可觀測(cè)特征。這些指示菌株不僅用于環(huán)境中群體感應(yīng)信號(hào)分子的檢測(cè)，還被廣泛應(yīng)用于群體感應(yīng)抑制機(jī)制的研究。然而，由于有益細(xì)菌本身可能分泌抗菌劑，會(huì)抑制致病細(xì)菌的生長(zhǎng)，因此在研究中需進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)評(píng)估，以明確群體感應(yīng)抑制效應(yīng)的來(lái)源——是真正的細(xì)菌間通訊中斷，還是單純的致病細(xì)菌生長(zhǎng)受抑（見(jiàn)圖4）。

圖4：群體感應(yīng)（QS）信號(hào)淬滅實(shí)例。需注意，致病細(xì)菌生長(zhǎng)受抑會(huì)直接導(dǎo)致其群體感應(yīng)相關(guān)活性（如發(fā)光）降低，需通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)排除該干擾因素。