小李

我在細胞實驗上明明觀察到很明顯的代謝抑制，移植到小鼠身上后怎么完全沒效果？

你用的是不是 3D 模型？

師兄

師弟

?。课矣眉毎伆?，按照文獻里的方案做的，應該沒問題吧……

2D 培養簡單高效，但回到真實腫瘤的缺氧、酸化環境，結論常常轉化無果。換成傳統 3D 模型，樣本小、信號弱，常規平臺靈敏度又測不出來。3D 模型選擇也有難度，如果不合適，輕則數據難解釋，重則推倒重來。

安捷倫 Seahorse XF Flex 平臺專為 3D 模型優化了靈敏度和檢測范圍，下面這套 3D 模型工作流程，把每一步的關鍵都拆解清楚了，花 1 分鐘參與安捷倫 Seahorse 能量代謝學術營挑戰知識小測，看完你就知道怎么做了——答對還有機會贏取國潮文創福袋、Hp 內膽鼠標墊、鼠標、文具套裝、京東卡、收納包等 150 份精美好禮！（答案都藏在文章里哦）

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常用 3D 模型如何選擇？

在開展代謝檢測之前，首先需要明確：所選模型是否恰當？2D 貼壁培養雖具備操作簡便、通量高的優點，但細胞平鋪于塑料表面，喪失了原始組織中的三維結構及細胞間相互作用。相比之下，3D 模型能夠維持接近生理狀態的細胞形態、基質相互作用以及物質交換微環境，從而更真實地反映體內的代謝特征與藥物響應。目前常用的體外 3D 模型主要包括：

選對模型是獲取可用數據的第一步。在此基礎上，還需要合適的檢測工具及標準的工作流程，從而確保代謝信號測定的穩定性與可重復性。

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安捷倫 XF 3D 應用流程：從樣本到數據的整套方案

面對 3D 樣本代謝檢測的種種挑戰，安捷倫提供了一套完整的 XF 3D 應用工作流程，從儀器平臺、專用耗材、檢測試劑到軟件分析，讓組織切片和類器官等模型的實時代謝分析變得可行。整個工作流程的核心包括四個環節：

專用分析儀：Seahorse XF Flex 分析儀是 24 孔平臺，專為 3D 樣本和代謝活性較高的細胞類型優化了靈敏度和檢測范圍，兼顧 2D 細胞、懸浮細胞與 3D 模型的多重需求。

專用微孔板和捕獲環：XF Flex 3D Capture 微孔板-L 在每孔底部設計了固定尺寸的樣品倉，配合網格壓環將組織或類器官穩穩定位，消除位移帶來的信號干擾。

專用檢測試劑盒：XF 3D Mito Stress Test 試劑盒針對組織樣本優化了抑制劑工作濃度，簡化了條件摸索過程，直接提供可用的實驗模板。

智能軟件支持：Wave Pro Controller 內嵌 3D 模板，自動計算 OCR/PER；Seahorse Analytics 提供歸一化、劑量-響應分析和多文件對比，結果直接導出至 GraphPad Prism 等工具。

工具配齊了，真正上手時，很多新手都會在細節翻車——組織位移、氣泡殘留、信號衰減，這些問題即便借助高精度儀器也難以完全避免。下面這份避坑指南，梳理了實驗中最為常見的四個問題及應對建議幫你提前避坑。

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避坑指南：4 個最容易忽視的細節

細節一：捕獲環安裝不當或殘留氣泡，導致信號劇烈波動

常見原因為網格下方存在氣泡，或組織未被充分壓緊而發生位移

安裝捕獲環后，務必在明場成像下使用 4 倍鏡逐孔檢查，確認網格緊貼孔底、組織居中且無氣泡殘留

細節二：OCR 持續下降，難以區分藥物效應與組織活性衰退

檢測起始 O? 水平應維持在約 152 mmHg，每個測量周期開始時需完全恢復，結束時不應低于 40 mmHg

若 O? 恢復不足，通常提示組織量過大或緩沖液氧合不充分，需相應調整組織尺寸或加強預充氧

細節三：重復實驗結果不一致，缺乏可靠的內部對照

每板至少保留 3 個不加抑制劑的對照孔，否則各批次間缺乏可比性，數據解讀失去可靠基礎

細節四：pH 超出傳感器線性范圍，影響測量準確性

XF 傳感器的pH線性檢測范圍為 7.4 ± 0.1 至 6.5 ± 0.1，超出該區間測量準確度將顯著下降

檢測前需嚴格校準緩沖液 pH；必要時在 FCCP 注射液中額外補充底物（如丙酮酸），以維持高呼吸負荷下的 pH 穩定

代謝是細胞功能的核心，驅動能量產生，也調控生物合成、氧化還原平衡、線粒體功能和細胞命運決定。當代謝失衡，細胞功能隨之紊亂，疾病便悄然發生。通過實時功能性代謝分析，可以深入洞察細胞激活、增殖、分化和死亡背后的能量邏輯，從而揭示疾病機制。

無論你研究的是癌細胞的代謝逃逸、代謝疾病的能量失衡、神經退行性病變中的線粒體損傷、干細胞分化的代謝開關，還是免疫細胞的活化與耗竭，安捷倫 Seahorse XF 平臺都能提供對應的活細胞功能性代謝分析方案——從細胞線粒體壓力測試、底物氧化依賴性解析、實時 ATP 速率測定、糖酵解速率定量，到專為 3D 組織與類器官優化的 XF Flex 高靈敏度檢測流程，助您在各自領域把代謝機制一層層拆解透徹。

內容策劃：王丹琦

內容審核：朱曉芳

題圖來源：圖蟲創意