2026年4月22日，韓國(guó)科學(xué)技術(shù)院（KIST）李沃彬團(tuán)隊(duì)聯(lián)合延世大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院姜圣勛團(tuán)隊(duì)等在Phytotherapy Research（中科院2區(qū)，IF=6.3）在線發(fā)表題為“Anti-allergic potential of Chamaecrista nomame and its compound luteolin for novel asthma therapy”的研究論文。

該研究深入探討了山扁豆（Chamaecrista nomame, CN）提取物及其活性成分木犀草素在過敏性哮喘中的治療潛力。通過活性追蹤分離方法，研究團(tuán)隊(duì)從CN提取物中鑒定出多個(gè)活性化合物，特別是木犀草素，它在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出了顯著的抗過敏作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CN和木犀草素通過抑制肥大細(xì)胞脫顆粒、減輕氣道炎癥及免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，為哮喘治療提供了新的思路，尤其是在免疫細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)節(jié)方面的作用，顯示出其作為天然藥物的潛力。研究不僅為抗過敏藥物的開發(fā)提供了新靶點(diǎn)，也為傳統(tǒng)藥用植物的現(xiàn)代化治療應(yīng)用提供了重要依據(jù)。

該論文的發(fā)表標(biāo)志著對(duì)過敏性疾病治療新策略的探索，木犀草素及其植物來源化合物在哮喘和其他免疫相關(guān)疾病中的應(yīng)用前景愈加明朗。

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【摘要】

哮喘是一種由免疫反應(yīng)失調(diào)和肥大細(xì)胞活化驅(qū)動(dòng)的慢性炎癥性疾病。雖然糖皮質(zhì)激素仍是主要治療手段，但長(zhǎng)期使用可能帶來不良反應(yīng)，因此有必要尋找更安全的替代治療方案。本研究旨在評(píng)價(jià) Chamaecrista nomame（CN）提取物及其活性成分木犀草素在過敏性哮喘中的治療潛力及其作用機(jī)制。研究通過活性追蹤分離方法，從 CN 提取物中鑒定活性化合物；采用卵清蛋白誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型評(píng)價(jià) CN 的體內(nèi)療效；并對(duì)骨髓來源肥大細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，以闡明木犀草素調(diào)控的分子通路。此外，本研究還利用屋塵螨刺激的人外周血單個(gè)核細(xì)胞開展細(xì)胞因子釋放實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，CN 提取物可顯著抑制肥大細(xì)胞脫顆粒和炎癥介質(zhì)釋放，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗過敏作用。木犀草素被鑒定為主要活性成分，能夠調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞中 FcεRI 介導(dǎo)的信號(hào)通路。在小鼠哮喘模型中，CN 明顯減輕氣道炎癥、黏液過度分泌和免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，其效果與糖皮質(zhì)激素相當(dāng)。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)表明，木犀草素通過下調(diào) NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路抑制促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生。此外，CN 和木犀草素均可顯著抑制屋塵螨刺激的人外周血單個(gè)核細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，提示其具有一定臨床相關(guān)性。上述結(jié)果表明，CN 和木犀草素有望作為治療過敏性哮喘的天然治療候選物，為傳統(tǒng)治療提供潛在替代方案。

01

研究背景及科學(xué)問題

哮喘是一種呼吸道慢性炎癥性疾病，主要表現(xiàn)為喘息、咳嗽、胸悶和氣短等影響生活質(zhì)量的癥狀。它是重要的公共衛(wèi)生問題，全球受影響人群數(shù)量龐大，且患病率仍在上升。哮喘的發(fā)病機(jī)制涉及遺傳因素與環(huán)境因素之間的復(fù)雜相互作用，可導(dǎo)致氣道炎癥、黏液過度分泌和氣道重塑。從組織學(xué)角度看，哮喘表現(xiàn)為黏膜下層增厚、上皮細(xì)胞脫落，以及嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和 T 細(xì)胞等免疫細(xì)胞在支氣管周圍區(qū)域浸潤(rùn)增加。這種免疫細(xì)胞浸潤(rùn)會(huì)進(jìn)一步加重氣道和肺部炎癥，增強(qiáng)氣道高反應(yīng)性，并加劇哮喘嚴(yán)重程度。

在參與哮喘發(fā)生發(fā)展的多種細(xì)胞類型中，肥大細(xì)胞在啟動(dòng)和維持炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。肥大細(xì)胞廣泛分布于全身，包括呼吸道組織，并容易受到多種刺激因素激活，其中包括反復(fù)暴露于過敏原。肥大細(xì)胞被激活后，其表面的 FcεRI 會(huì)發(fā)生 IgE 介導(dǎo)的聚集，從而迅速通過脫顆粒釋放炎癥介質(zhì)。FcεRI 聚集后，肥大細(xì)胞會(huì)釋放多種預(yù)先形成或新合成的介質(zhì)，包括組胺、白三烯、前列腺素和細(xì)胞因子。這些介質(zhì)會(huì)引起支氣管收縮、黏液分泌增加和炎癥反應(yīng)，共同導(dǎo)致過敏和哮喘的典型癥狀。

目前，哮喘治療主要依賴支氣管擴(kuò)張劑和吸入性糖皮質(zhì)激素，前者用于改善氣流受限，后者用于減輕炎癥。然而，長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素可能造成生長(zhǎng)抑制、骨質(zhì)疏松和腎上腺抑制等不良反應(yīng)，許多患者仍然存在癥狀控制不足的問題。此外，相當(dāng)一部分重癥哮喘患者對(duì)常規(guī)治療反應(yīng)不佳，這進(jìn)一步說明有必要開發(fā)安全性和療效更理想的替代治療方案。

在這一背景下，天然產(chǎn)物，尤其是具有傳統(tǒng)應(yīng)用歷史的藥用植物，正逐漸受到關(guān)注，被認(rèn)為可能成為潛在的抗哮喘藥物。Chamaecrista nomame（CN）（Siebold）H. Ohashi 屬于豆科植物，傳統(tǒng)上在亞洲醫(yī)學(xué)中用于抗肥胖、抗氧化和抗炎，其作用被認(rèn)為與槲皮苷、原兒茶酸和阿魏酸等植物化學(xué)成分有關(guān)。然而，CN 的特定免疫調(diào)節(jié)作用，尤其是其對(duì)哮喘中肥大細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)的調(diào)控作用，目前仍缺乏充分研究。

本研究旨在尋找具有抗過敏特性的植物來源新化合物，用于哮喘治療。我們對(duì) 302 種植物提取物進(jìn)行了系統(tǒng)篩選，發(fā)現(xiàn) CN 乙醇提取物具有較強(qiáng)的抗脫顆?；钚?，因此將其確定為有前景的候選物。在卵清蛋白誘導(dǎo)的小鼠過敏性哮喘模型中，CN 顯著抑制了過敏反應(yīng)。我們進(jìn)一步研究了 CN 中關(guān)鍵成分木犀草素在肥大細(xì)胞中的機(jī)制作用，證明其能夠調(diào)節(jié)過敏反應(yīng)相關(guān)的關(guān)鍵信號(hào)通路。最后，我們?cè)谖輭m螨提取物刺激的人外周血單個(gè)核細(xì)胞中驗(yàn)證了 CN 和木犀草素的抗過敏作用。上述結(jié)果提示，CN 和木犀草素作為新型天然來源藥物，在治療過敏性哮喘方面具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

02

重要發(fā)現(xiàn)及亮點(diǎn)

3.1 CN 提取物在體外強(qiáng)效抑制肥大細(xì)胞脫顆粒和炎癥介質(zhì)釋放

為篩選可用于治療過敏性哮喘的潛在植物提取物，我們對(duì) 302 種植物提取物進(jìn)行了體外系統(tǒng)篩選，以評(píng)價(jià)其抑制脫顆粒的能力。這些提取物來自韓國(guó)本土植物的乙醇提取物，研究檢測(cè)其在 RBL-2H3 嗜堿性粒細(xì)胞系中，經(jīng) DNP-IgE/DNP-BSA 處理后抑制 β-己糖胺苷酶釋放的能力。β-己糖胺苷酶釋放是脫顆粒的標(biāo)志。結(jié)果顯示，13 種提取物對(duì) β-己糖胺苷酶活性具有顯著抑制作用，抑制水平超過 50% 閾值。值得注意的是，CN 的地上部分和根部提取物均表現(xiàn)出抑制作用?；谶@些結(jié)果，我們進(jìn)一步對(duì) CN 開展深入研究。

在最高 100 μg/mL 劑量下，CN 對(duì) RBL-2H3 細(xì)胞未表現(xiàn)出明顯細(xì)胞毒性。隨后，我們?cè)u(píng)價(jià)了 CN 總乙醇提取物及其正己烷組分、乙酸乙酯組分的抗脫顆?；钚?。結(jié)果顯示，三種組分均顯著抑制 β-己糖胺苷酶釋放，提示 CN 的抗過敏作用可能由多種活性成分共同參與。此外，我們還檢測(cè)了不同乙醇濃度制備的 CN 提取物，乙醇濃度范圍為 0% 至 95%。結(jié)果顯示，50%、70% 和 95% 乙醇提取物能夠有效抑制脫顆粒。

為進(jìn)一步評(píng)價(jià) CN 的抗過敏特性，我們檢測(cè)了其對(duì)哮喘發(fā)病相關(guān)關(guān)鍵炎癥介質(zhì)釋放的影響。RBL-2H3 細(xì)胞可模擬肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞活性，在 DNP-IgE/DNP-BSA 刺激下發(fā)生脫顆粒并釋放細(xì)胞因子。DNP-IgE/DNP-BSA 處理后，組胺、TNF-α、IL-4 和 PGE2 水平均明顯升高。然而，CN 以劑量依賴方式顯著抑制了這些介質(zhì)的釋放?？傮w而言，這些結(jié)果表明，CN 提取物可在體外強(qiáng)效抑制肥大細(xì)胞脫顆粒和多種炎癥介質(zhì)釋放，支持其作為過敏性哮喘潛在治療藥物的可能性。

圖 1｜CN 提取物抑制 RBL-2H3 肥大細(xì)胞中 IgE 介導(dǎo)的脫顆粒和炎癥介質(zhì)釋放。
（A）對(duì) 302 種天然產(chǎn)物提取物進(jìn)行篩選，評(píng)價(jià)其在 IgE 致敏、抗原刺激的 RBL-2H3 細(xì)胞中抑制 β-己糖胺苷酶釋放的能力。每個(gè)點(diǎn)代表一種在固定濃度下測(cè)試的提取物。紅線表示 β-己糖胺苷酶活性的平均值，藍(lán)色虛線表示 2-sigma 閾值。CN 的地上部分和根部提取物被標(biāo)記為顯著抑制劑。
（B–F）CN 對(duì) RBL-2H3 細(xì)胞中介質(zhì)釋放的劑量依賴性影響。細(xì)胞先用抗 DNP-IgE 致敏，隨后分別用 20 μg/mL CN（CN20）或 40 μg/mL CN（CN40）處理 1 小時(shí)，再用 DNP-BSA 挑戰(zhàn)。
（B）DNP-BSA 刺激后檢測(cè) β-己糖胺苷酶活性。
（C）采用 ELISA 定量檢測(cè)組胺水平。
（D–F）采用 ELISA 檢測(cè)促炎細(xì)胞因子 TNF-α、IL-4 和 PGE2 水平。
數(shù)據(jù)以均值 ± SEM 表示。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 Vehicle 組相比；# < 0.01，## < 0.001，與 Control 組相比。

3.2 CN 在 OVA 誘導(dǎo)的哮喘模型中減輕氣道炎癥并調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)

為驗(yàn)證 CN 在體外表現(xiàn)出的抗過敏作用，我們采用 OVA 誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型評(píng)價(jià)其療效。小鼠致敏和 OVA 挑戰(zhàn)共持續(xù) 28 天，在此期間，CN 以 10、50 和 100 mg/kg 不同劑量連續(xù)口服給藥 14 天，并以 2.5 mg/kg 地塞米松作為陽性對(duì)照。采用 H&E 染色對(duì)肺組織進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示 OVA 組出現(xiàn)嚴(yán)重的支氣管周圍和血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。PAS 染色進(jìn)一步顯示，OVA 組存在明顯的黏液過度分泌。然而，CN 處理顯著減少了炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并明顯抑制黏液過度分泌，其效果與地塞米松相當(dāng)。此外，甲苯胺藍(lán)染色顯示，OVA 挑戰(zhàn)組肥大細(xì)胞數(shù)量明顯增加，而 CN 處理顯著減少了氣道組織中的肥大細(xì)胞浸潤(rùn)和脫顆粒。這些結(jié)果為 CN 減輕過敏性氣道炎癥提供了直接的體內(nèi)證據(jù)，其作用至少部分通過抑制肥大細(xì)胞活化實(shí)現(xiàn)。

圖 2｜OVA 誘導(dǎo)哮喘模型中 CN 處理后的肺組織組織學(xué)分析及 BALF 免疫細(xì)胞浸潤(rùn)情況。
（A）各處理組肺組織切片代表性圖像，分別采用 H&E 染色、PAS 染色和甲苯胺藍(lán)染色，放大倍數(shù)為 ×200。實(shí)驗(yàn)分組包括對(duì)照組（CON）、OVA 挑戰(zhàn)組（OVA）、OVA 挑戰(zhàn)后地塞米松處理組（DEX，2.5 mg/kg），以及 OVA 挑戰(zhàn)后 CN 處理組（CN10、CN50、CN100，分別為 10、50 和 100 mg/kg）。
（B）H&E 染色切片中每個(gè)視野內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量的定量分析。
（C）PAS 陽性區(qū)域的定量分析。
（D）肺組織中肥大細(xì)胞浸潤(rùn)的定量分析。
（E、F）分析 BALF 中免疫細(xì)胞的百分比和絕對(duì)數(shù)量。
（G）評(píng)價(jià) BALF 中中性粒細(xì)胞的百分比和絕對(duì)數(shù)量。
（H）評(píng)價(jià) BALF 中間質(zhì)巨噬細(xì)胞的百分比和絕對(duì)數(shù)量。
數(shù)據(jù)以均值 ± SEM 表示，每組 n = 6。## < 0.001，與 Control 組相比；**p < 0.01，***p < 0.001，與 OVA 組相比。

為進(jìn)一步研究 CN 對(duì)過敏性炎癥的影響，我們分析了支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞組成。比較結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，OVA 組 BALF 中總炎癥細(xì)胞、多形核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量均顯著升高。然而，與 OVA 組相比，CN 給藥顯著降低了 BALF 中炎癥細(xì)胞數(shù)量，尤其是多形核細(xì)胞數(shù)量。進(jìn)一步分析 BALF 中不同炎癥細(xì)胞類型發(fā)現(xiàn)，50 mg/kg CN 處理可降低中性粒細(xì)胞的比例和數(shù)量。值得注意的是，CN 還減少了肺泡巨噬細(xì)胞和間質(zhì)巨噬細(xì)胞數(shù)量，但對(duì)樹突狀細(xì)胞或 B 細(xì)胞無顯著影響。此外，CN 顯著降低了 BALF 中 T 細(xì)胞數(shù)量。這些結(jié)果提示，CN 具有較廣泛的減輕哮喘小鼠炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的能力，并對(duì)中性粒細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、間質(zhì)巨噬細(xì)胞和 T 細(xì)胞產(chǎn)生明顯影響。

在過敏性哮喘中，Th2 細(xì)胞活化與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。Th2 相關(guān)細(xì)胞因子在嗜酸性粒細(xì)胞活化和 B 細(xì)胞產(chǎn)生 IgE 過程中發(fā)揮重要作用。比較研究顯示，與對(duì)照組相比，OVA 致敏和挑戰(zhàn)后，OVA 特異性 IgE 以及 IL-4、TNF-α、IL-2、IL-10 和 BCMA 的產(chǎn)生均顯著增加。然而，CN 給藥有效抑制了這些細(xì)胞因子的升高，其結(jié)果與地塞米松處理組相當(dāng)。這些發(fā)現(xiàn)提示，CN 可能通過調(diào)節(jié) Th2 細(xì)胞反應(yīng)并減少 OVA 特異性 IgE 產(chǎn)生，從而緩解過敏性氣道炎癥。

圖 3｜CN 處理后，哮喘小鼠炎癥細(xì)胞因子和 OVA 特異性免疫球蛋白水平降低。
采用 ELISA 檢測(cè)不同處理組血清中以下指標(biāo)水平：
（A）OVA 特異性 IgE；
（B）IL-4；
（C）TNF-α；
（D）IL-2；
（E）IL-10；
（F）BCMA。
數(shù)據(jù)以均值 ± SEM 表示。 < 0.05，## < 0.001，與 Control 組相比；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 OVA 組相比。

3.3 CN 的活性追蹤分離鑒定出木犀草素是肥大細(xì)胞活化的強(qiáng)效抑制劑

為鑒定負(fù)責(zé) CN 抗過敏作用的活性成分，我們采用活性追蹤分離方法。CN 的粗乙酸乙酯組分經(jīng)柱色譜分離后，共分離并鑒定出 17 種化合物：chrysophanol（1）、emodin（2）、drimiopsin H（3）、altechromone A（4）、ethyl caffeate（5）、p-coumaric acid（6）、isorhapontigenin（7）、resveratrol（8）、eriodictyol（9）、luteolin（10）、catechin（11）、apigenin（12）、(2S)-3′,4′,7-trihydroxyflavan-(4β?8)-catechin（13）、(2S)-4′,7-dihydroxyflavan-(4β?8)-catechin（14）、isoquercitrin（15）、(2S)-3′,4′,7-trihydroxyflavan-(4α?8)-catechin（16）和 (2S)-4′,7-dihydroxyflavan-(4α?8)-catechin（17）。采用二極管陣列檢測(cè)器的 HPLC 分析在 280 nm 下分別于 15.72、24.43、25.48、36.52、43.36 和 45.06 min 處檢測(cè)到相應(yīng)化合物峰。這些化合物的鑒定基于提取物中未知峰的保留時(shí)間和吸收光譜與已分離化合物數(shù)據(jù)的比較。

隨后，我們?cè)u(píng)價(jià)了每種分離化合物對(duì) CN 總體抗過敏活性的貢獻(xiàn)，方法是在 RBL-2H3 細(xì)胞中檢測(cè)其抑制 IgE 介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化能力。我們測(cè)定了脫顆粒、組胺釋放，以及 TNF-α、IL-4 和 PGE2 的產(chǎn)生。結(jié)果顯示，C2（emodin）、C9（eriodictyol）、C10（luteolin）、C11（catechin）和 C12（apigenin）在五項(xiàng)檢測(cè)中均表現(xiàn)出顯著抑制作用，其中木犀草素的效果最為突出。鑒于其顯著療效，木犀草素被選定用于后續(xù)研究，以進(jìn)一步闡明其抑制過敏性哮喘的作用機(jī)制。

圖 4｜CN 提取物的 HPLC-DAD 分析及分離化合物對(duì) RBL-2H3 肥大細(xì)胞 IgE 介導(dǎo)活化的影響。
（A）編號(hào)峰對(duì)應(yīng)從 CN 中分離得到的具體化合物，并展示從 CN 中分離出的 17 種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
（B–F）分離化合物 1–17 對(duì) RBL-2H3 肥大細(xì)胞中 IgE 介導(dǎo)反應(yīng)的影響。細(xì)胞先用抗 DNP-IgE 致敏，隨后用 17 種分離化合物分別以 40 μM 處理 1 小時(shí)，再用 DNP-BSA 挑戰(zhàn)。檢測(cè)指標(biāo)包括：
（B）β-己糖胺苷酶釋放；
（C）組胺釋放；
（D）TNF-α 產(chǎn)生；
（E）IL-4 產(chǎn)生；
（F）PGE2 產(chǎn)生。
C1：chrysophanol；C2：emodin；C3：drimiopsin H；C4：altechromone A；C5：ethyl caffeate；C6：p-coumaric acid；C7：isorhapontigenin；C8：resveratrol；C9：eriodictyol；C10：luteolin；C11：catechin；C12：apigenin；C13 和 C16：兩種 trihydroxyflavan-catechin 類二聚體；C14：一種 dihydroxyflavan-catechin 類二聚體；C15：isoquercitrin；C17：另一種 dihydroxyflavan-catechin 類二聚體。
數(shù)據(jù)以均值 ± SEM 表示。# < 0.01，## < 0.001，與 Control 組相比；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 IgE 組相比。

3.4 木犀草素抑制骨髓來源肥大細(xì)胞脫顆粒并減少 Th2 細(xì)胞因子產(chǎn)生

為確定木犀草素對(duì)肥大細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)作用，我們系統(tǒng)考察了其對(duì)小鼠肥大細(xì)胞顆粒釋放和 Th2 相關(guān)細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。研究采用經(jīng)典的骨髓體外分化方法制備肥大細(xì)胞。我們使用富含 IL-3 的培養(yǎng)基培養(yǎng) BMMCs 至少 4 周，最終獲得高純度的 c-kit+FcεRI+ 細(xì)胞群。當(dāng)細(xì)胞暴露于 IgE-抗原復(fù)合物后，木犀草素能夠有效阻止 β-己糖胺苷酶釋放，表明其具有抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的能力。鑒于 IL-4 和 IL-13 等 Th2 細(xì)胞因子在驅(qū)動(dòng)過敏性炎癥中具有關(guān)鍵作用，并與肥大細(xì)胞活化密切相關(guān)，我們進(jìn)一步檢測(cè)了木犀草素對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。結(jié)果顯示，木犀草素顯著降低了 DNP-IgE/DNP-BSA 刺激的 BMMCs 中 IL-4 和 IL-13 的釋放，說明其能夠抑制肥大細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。這些結(jié)果為木犀草素的抗過敏特性提供了機(jī)制解釋，并提示其靶向肥大細(xì)胞活化的能力可能參與了 CN 提取物在體內(nèi)觀察到的治療作用。

3.5 木犀草素調(diào)節(jié) BMMCs 轉(zhuǎn)錄組并抑制關(guān)鍵炎癥信號(hào)通路

肥大細(xì)胞主要是組織駐留性粒細(xì)胞，在過敏反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。為進(jìn)一步闡明木犀草素對(duì) BMMCs 產(chǎn)生作用的分子機(jī)制，我們對(duì)經(jīng) DNP-IgE/DNP-BSA 刺激并接受或未接受木犀草素處理的細(xì)胞進(jìn)行了 RNA 測(cè)序。主成分分析顯示，不同處理組形成明顯聚類，說明處理方式引起了顯著的轉(zhuǎn)錄組改變。差異基因表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，木犀草素處理后共有 3374 個(gè)差異表達(dá)基因，其中 2081 個(gè)基因明顯下調(diào)，提示木犀草素的主要作用之一是抑制基因表達(dá)?；鹕綀D進(jìn)一步顯示，木犀草素處理顯著影響了多個(gè)基因，其中許多下調(diào)基因與炎癥過程相關(guān)。后續(xù)的 Gene Ontology 和 KEGG 通路富集分析顯示，木犀草素顯著調(diào)節(jié)多個(gè)生物過程，其中下調(diào)基因明顯富集于 NF-κB、MAPK 和 TNF 等關(guān)鍵炎癥信號(hào)通路。差異表達(dá)基因熱圖進(jìn)一步支持這一結(jié)果，顯示這些通路內(nèi)相關(guān)基因明顯下調(diào)。重要的是，細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，本實(shí)驗(yàn)所用濃度的木犀草素不會(huì)導(dǎo)致 BMMCs 細(xì)胞毒性，說明觀察到的轉(zhuǎn)錄組變化反映的是調(diào)控作用，而非細(xì)胞應(yīng)激的繼發(fā)反應(yīng)。這些結(jié)果表明，木犀草素可深刻改變活化肥大細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組，尤其是抑制與 NF-κB、MAPK 和 TNF 等關(guān)鍵炎癥信號(hào)通路相關(guān)的基因表達(dá)。

圖 5｜轉(zhuǎn)錄組分析揭示 CN 來源木犀草素對(duì) BMMCs 細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的調(diào)控作用。
（A）骨髓來源肥大細(xì)胞 RNA 測(cè)序數(shù)據(jù)的主成分分析。每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)樣本，并按處理組著色：Control 組、BSA 組和 BSA + luteolin 組。PCA 圖顯示不同處理組樣本形成明顯聚類，提示基因表達(dá)發(fā)生顯著變化。
（B）Venn 圖展示 DNP-BSA 刺激的 BMMCs 與 DNP-BSA 刺激后木犀草素處理的 BMMCs 中差異表達(dá)基因數(shù)量。差異表達(dá)基因篩選標(biāo)準(zhǔn)為調(diào)整后 p < 0.05。
（C）火山圖展示木犀草素處理的 DNP-BSA 刺激 BMMCs 與 Vehicle 處理細(xì)胞之間的差異基因表達(dá)。橫軸表示基因表達(dá)的 log2 倍數(shù)變化，縱軸表示 ?log10 調(diào)整后 p 值。每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)基因。顯著上調(diào)基因顯示為紅色，顯著下調(diào)基因顯示為藍(lán)色，圖中標(biāo)注了正文中提及的關(guān)鍵基因。
（D、E）木犀草素處理 BMMCs 中上調(diào)和下調(diào)差異表達(dá)基因的 Gene Ontology 和 KEGG 通路富集分析。圖中顯示最顯著富集的生物過程和 KEGG 通路，并按調(diào)整后 p 值排序。柱狀圖展示每個(gè)術(shù)語相關(guān)的基因數(shù)量和富集因子。
（F）熱圖顯示 NF-κB、MAPK 和 TNF 信號(hào)通路中所選基因的標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)水平。每一行代表一個(gè)基因，每一列代表一個(gè)樣本。顏色表示各基因的相對(duì)表達(dá)水平，紅色表示較高表達(dá)，藍(lán)色表示較低表達(dá)。

3.6 木犀草素抑制 BMMCs 中 NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路

為驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果，并進(jìn)一步闡明木犀草素抗過敏作用的分子機(jī)制，我們檢測(cè)了其對(duì)肥大細(xì)胞活化相關(guān)關(guān)鍵信號(hào)通路的影響。對(duì) DNP-IgE/DNP-BSA 刺激的 BMMCs 裂解物進(jìn)行免疫印跡分析后發(fā)現(xiàn)，木犀草素顯著降低了 p65、p38、ERK 和 JNK 的磷酸化水平，提示其可抑制 NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路。為進(jìn)一步支持這一發(fā)現(xiàn)，我們檢測(cè)了木犀草素對(duì) NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路相關(guān)關(guān)鍵細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。qRT-PCR 分析顯示，木犀草素處理顯著下調(diào)了活化 BMMCs 中 Tnf-α、IL-1β 和 Ptgs2 的表達(dá)。此外，ELISA 檢測(cè)結(jié)果顯示，木犀草素顯著抑制 DNP-BSA 刺激的 BMMCs 分泌 IL-6、TNF-α 和 MCP-1。總體而言，這些結(jié)果有力證明，木犀草素至少部分通過抑制 NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路來抑制肥大細(xì)胞活化，從而降低促炎細(xì)胞因子的表達(dá)和分泌。

3.7 CN 和木犀草素抑制屋塵螨刺激的人 PBMCs 中炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生

為進(jìn)一步在臨床相關(guān)背景下驗(yàn)證 CN 和木犀草素的治療潛力，我們研究了其對(duì)屋塵螨提取物刺激的人外周血單個(gè)核細(xì)胞中細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。屋塵螨是常見的哮喘過敏原。研究從 13 名年齡為 19 至 79 歲的人類供體中分離 PBMCs，并在有或無 CN、木犀草素的條件下使用屋塵螨刺激。與未刺激細(xì)胞相比，屋塵螨刺激顯著增加了促炎細(xì)胞因子 IL-6、TNF-α 以及 IL-10 的產(chǎn)生。CN 和木犀草素均以劑量依賴方式顯著抑制屋塵螨誘導(dǎo)的 IL-6、TNF-α 和 IL-10 產(chǎn)生。對(duì)關(guān)鍵炎癥細(xì)胞因子，尤其是 IL-6 和 TNF-α 的顯著抑制，支持了二者在過敏性氣道疾病中的治療潛力。此外，IL-10 的下降提示 CN 和木犀草素可能調(diào)節(jié)整體炎癥反應(yīng)。上述結(jié)果表明，CN 和木犀草素能夠有效調(diào)節(jié)人免疫細(xì)胞在接觸臨床相關(guān)過敏原后的炎癥反應(yīng)。

圖 6｜木犀草素抑制活化 BMMCs 中 NF-κB 和 MAPK 信號(hào)通路，并抑制屋塵螨刺激的人 PBMCs 中細(xì)胞因子產(chǎn)生。
（A、B）BMMCs 先用抗 DNP-IgE 致敏，隨后用木犀草素處理 1 小時(shí)，再用 DNP-BSA 干預(yù)。（A）免疫印跡分析顯示不同時(shí)間點(diǎn)，即 5、10 和 15 分鐘時(shí) p65、p38、Erk 和 Jnk 的磷酸化水平。（B）對(duì)磷酸化 p65、磷酸化 p38、磷酸化 Erk 和磷酸化 Jnk 的相對(duì)條帶強(qiáng)度進(jìn)行定量，并以總蛋白水平進(jìn)行歸一化。（C–E）木犀草素對(duì)活化 BMMCs 中促炎細(xì)胞因子和趨化因子產(chǎn)生的影響。細(xì)胞按照（A）中的方法進(jìn)行致敏和預(yù)處理，并用 DNP-BSA 刺激 6 小時(shí)。采用 ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中以下指標(biāo)水平：（C）IL-6；（D）TNF-α；（E）MCP-1。（F–H）CN 提取物和木犀草素對(duì)屋塵螨刺激的人 PBMCs 中細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。從人類供體中分離 PBMCs，并在有或無 CN 提取物、木犀草素的條件下用屋塵螨刺激 24 小時(shí)。CN 濃度為 10 或 50 μg/mL，木犀草素濃度為 10 或 20 μM。采用多重 ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中以下指標(biāo)水平：（F）IL-6；（G）TNF-α；（H）IL-10。數(shù)據(jù)以均值 ± SEM 表示。## < 0.001，與 Control 組相比；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，與 Vehicle 組相比。

【Citation】:Kang, T. K., Kim, M., Le, T. T., Park, G., Jung, Y., Jeong, H., Yoo, Y., Lee, W. B., & Jung, S. H. (2026). Anti-allergic potential of Chamaecrista nomame and its compound luteolin for novel asthma therapy.Phytotherapy Research, 0, 1–12.

【貢獻(xiàn)】★★★★★

綜上，CN 和木犀草素能夠通過抑制肥大細(xì)胞活化并調(diào)節(jié)關(guān)鍵炎癥信號(hào)通路，減輕過敏性炎癥。二者具有多成分、多層級(jí)調(diào)控特征，提示其可能作為過敏性氣道疾病的輔助干預(yù)手段。未來仍需開展進(jìn)一步的體內(nèi)研究、機(jī)制研究和轉(zhuǎn)化研究，以明確其治療參數(shù)和臨床適用性。

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