2026年1月6日，McMaster University Gregory R. Steinberg、Dongdong Wang 團(tuán)隊聯(lián)合 Icahn School of Medicine at Mount Sinai Scott L. Friedman 等，在Cell Metabolism（中科院生物學(xué)1區(qū)，TOP期刊，IF=30.9）發(fā)表題為“Dual inhibition of ACLY and ACSS2 by EVT0185 reduces steatosis, hepatic stellate cell activation, and fibrosis in mouse models of MASH”的研究論文。

該研究圍繞代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）中“脂肪變性—肝星狀細(xì)胞活化—肝纖維化”的病理鏈條展開，系統(tǒng)評價了雙重抑制 ACLY 和 ACSS2 的小分子化合物 EVT0185 對 MASH 及肝纖維化的干預(yù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，EVT0185 不僅能夠降低血清和肝臟甘油三酯、改善胰島素抵抗和肝脂肪變性，還能在多種 MASH 小鼠模型中顯著減輕肝纖維化，并且這一抗纖維化作用并不完全依賴體重下降或脂肪變性改善。機(jī)制上，EVT0185 通過抑制乙酸經(jīng) ACSS2 參與乙酰輔酶A代謝及膽固醇合成，削弱 TGFβ1 誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞活化、膠原生成和細(xì)胞增殖。空間轉(zhuǎn)錄組、單細(xì)胞 RNA 測序、人肝切片及原代人肝星狀細(xì)胞實驗進(jìn)一步表明，ACLY/ACSS2 雙靶點干預(yù)能夠同時作用于肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝和肝星狀細(xì)胞纖維化程序，為 MASH 及代謝相關(guān)肝纖維化提供了一種兼具改善代謝、減少脂肪沉積和抗纖維化潛力的新型治療策略。

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【摘要】

代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）的特征是脂肪變性、炎癥以及由肝星狀細(xì)胞（HSC）活化驅(qū)動的纖維化。乙酰輔酶A是從頭脂肪生成（DNL）和膽固醇合成的核心底物，它既可由檸檬酸經(jīng)ATP檸檬酸裂解酶（ACLY）生成，也可由乙酸經(jīng)乙酰輔酶A合成酶2（ACSS2）生成。本文證明，ACLY和ACSS2的雙重抑制劑EVT0185能夠降低血清和肝臟甘油三酯、改善胰島素抵抗并減輕纖維化。EVT0185在體內(nèi)和體外均可直接抑制HSC活化；空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)和單細(xì)胞RNA測序顯示，經(jīng)ACSS2介導(dǎo)的乙酸代謝以及膽固醇合成受到抑制，是產(chǎn)生該表型的關(guān)鍵驅(qū)動因素。EVT0185還可抑制人肝切片中的從頭脂肪生成，并阻斷TGFβ1誘導(dǎo)的原代人HSC活化。這些發(fā)現(xiàn)表明，通過同時抑制ACLY和ACSS2來靶向膽固醇與乙酸代謝，可能成為治療MASH和肝纖維化的一種有前景的治療策略。

01

研究背景及科學(xué)問題

肥胖、胰島素抵抗和血脂異常是代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）發(fā)生發(fā)展的主要危險因素。MASH是一種進(jìn)展性肝病，可進(jìn)一步導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌。MASH從脂肪變性進(jìn)展為具有臨床意義的肝病，主要由肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化推動。在健康肝臟中，HSC負(fù)責(zé)儲存維生素A并維持肝臟結(jié)構(gòu)；但在代謝應(yīng)激和炎癥環(huán)境下，HSC會轉(zhuǎn)分化為具有增殖能力的肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，分泌細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），從而推動纖維化。盡管近期已有靶向甲狀腺激素受體β（THRβ）的激動劑（如resmetirom）和靶向胰高血糖素樣肽-1受體（GLP-1R）的激動劑（如semaglutide）獲批用于MASH治療，但與安慰劑對照相比，只有約四分之一患者在纖維化組織學(xué)表現(xiàn)上出現(xiàn)改善。這一結(jié)果可能反映出HSC并不表達(dá)THRβ和GLP-1R。因此，能夠同時靶向肝細(xì)胞脂肪變性和HSC活化的策略，可能使更廣泛的患者獲益。

MASH的一個典型特征是從頭脂肪生成（DNL）增強(qiáng)，即由胞質(zhì)乙酰輔酶A合成脂肪酸。在這一通路中，乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和脂肪酸合酶（FASN）生成棕櫚酸（16:0），隨后可被硬脂酰輔酶A去飽和酶1（SCD1）進(jìn)一步修飾，生成棕櫚油酸和油酸等單不飽和脂肪酸，并由二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶2（DGAT2）整合進(jìn)入甘油三酯。AMP活化蛋白激酶（AMPK）對ACC的磷酸化和抑制，或者對ACC、FASN、SCD1和DGAT2進(jìn)行遺傳或藥理學(xué)抑制，均已被證明可在MASH臨床前模型中降低脂肪變性、炎癥和纖維化。DNL增加還會使HSC對促纖維化信號更加敏感；藥理學(xué)抑制DNL則可減少培養(yǎng)細(xì)胞中的HSC活化。然而，在晚期纖維化臨床前模型中的研究顯示，將ACC抑制劑與過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）激動劑或resmetirom聯(lián)合使用，并不能進(jìn)一步降低纖維化。與此一致的是，2b期研究中將DGAT2抑制劑與ACC抑制劑聯(lián)合使用，雖然意在緩解ACC抑制所引起的血清甘油三酯升高，但并未帶來具有臨床意義的MASH和纖維化改善。這些數(shù)據(jù)表明，盡管DNL抑制劑在臨床前模型中可顯著降低脂肪變性，并能在培養(yǎng)細(xì)胞中減少HSC活化，但若要降低臨床人群中的纖維化，可能還需要靶向其他代謝程序。

除脂肪酸外，胞質(zhì)乙酰輔酶A也是膽固醇合成的主要結(jié)構(gòu)單元。乙酰輔酶A主要通過兩條途徑生成：一是由檸檬酸經(jīng)ATP檸檬酸裂解酶（ACLY）生成；二是由乙酸經(jīng)乙酰輔酶A合成酶2（ACSS2）生成。膽固醇升高與MASH纖維化發(fā)生密切相關(guān)，近期研究還發(fā)現(xiàn)，攜帶PNPLA3 I148M變異的人群膽固醇水平也更高。從機(jī)制上看，膽固醇可激活HSC，并增強(qiáng)HSC對TGFβ1的敏感性；這一效應(yīng)可能通過肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TAZ/WWTR1被激活，進(jìn)而促使印度刺猬因子（IHH）分泌并激活HSC來實現(xiàn)。在MASH患者中，ACLY和ACSS2表達(dá)均上調(diào)。在MASH小鼠模型中，肝細(xì)胞ACLY的遺傳性抑制對脂肪變性的影響并不一致：有研究顯示脂肪變性降低，也有研究顯示無影響，甚至出現(xiàn)升高。相比之下，在小鼠模型中使用bempedoic acid（BA）處理可降低MASH；該藥物抑制ACLY并激活小鼠肝細(xì)胞中含AMPKβ1的異源三聚體，而其作用并不依賴肝細(xì)胞ACLY活性。抑制肝細(xì)胞ACLY活性的一個典型現(xiàn)象，是ACSS2表達(dá)上升；ACSS2可清除乙酸以維持DNL所需乙酰輔酶A供應(yīng)。這一點可能具有重要臨床意義，因為乙醇可轉(zhuǎn)化為乙酸，而MASH患者門靜脈中的乙醇水平顯著升高，提示單獨抑制ACLY在該臨床人群中可能效果有限。值得注意的是，近期有研究發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞中遺傳性刪除ACLY和ACSS2并不能降低小鼠脂肪變性，原因可能與PPARα活性和脂肪酸氧化下降有關(guān)。與之相反，在本文修訂期間發(fā)表的一項研究發(fā)現(xiàn)，使用AAV8驅(qū)動的短發(fā)夾RNA敲低肝細(xì)胞中的ACLY和ACSS2，可提高PPARα水平并降低小鼠脂肪變性和MASH。雖然這仍屬推測，但不同研究間相反的結(jié)果，可能源于完全遺傳抑制與shRNA介導(dǎo)的部分抑制之間存在不同反應(yīng)。藥理學(xué)同時抑制肝細(xì)胞以及HSC中的ACLY和ACSS2會產(chǎn)生何種影響，目前尚不清楚。

EVT0185是一種新近描述的ACLY和ACSS2抑制劑，可抑制肝細(xì)胞DNL，并通過提高腫瘤免疫原性，在肝細(xì)胞癌臨床前模型中降低腫瘤負(fù)荷。EVT0185的抑制活性依賴于脂肪酰輔酶A合成酶SLC27A2將其轉(zhuǎn)化為EVT0185-CoA。EVT0185對血糖控制、血脂異常、MASH、肝纖維化和HSC活化的影響此前尚未得到闡明。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)EVT0185可抑制肝臟脂肪變性、MASH、胰島素抵抗和肝纖維化，并可在體內(nèi)和體外直接抑制HSC活化。其對HSC活化的抑制作用并不依賴脂肪變性下降；在葡萄糖和乙酸存在時，該作用具有細(xì)胞自主性，并需要SLC27A2、ACLY和ACSS2參與，同時可被膽固醇前體甲羥戊酸內(nèi)酯所阻斷。這些數(shù)據(jù)表明，乙酸、ACSS2和膽固醇在培養(yǎng)細(xì)胞中驅(qū)動HSC活化方面具有關(guān)鍵作用，也提示EVT0185對該通路的拮抗不僅能夠降低脂肪變性，還能有效減輕肝纖維化。

02

重要發(fā)現(xiàn)及亮點

EVT0185在室溫飼養(yǎng)的飲食誘導(dǎo)小鼠模型中改善胰島素敏感性并降低MASH，且不升高血漿甘油三酯（圖1，圖S1）

來自Taconic Biosciences的飲食誘導(dǎo)肥胖MASH（DIN-MASH）小鼠，從6周齡開始喂食高脂（40%熱量）、高果糖（20%熱量）和高膽固醇（2%熱量）飲食，即Gubra-Amylin NASH（GAN）飲食，持續(xù)20周。隨后根據(jù)體重、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平，將小鼠隨機(jī)分為兩組（圖S1A–S1C）。該模型已被證明能夠較好地模擬人類MASH的轉(zhuǎn)錄組特征。隨機(jī)分組后，小鼠每日經(jīng)口灌胃給予載體或EVT0185，持續(xù)5周（圖1A）。與載體對照組相比，EVT0185處理可防止體重增加（圖S1D），降低口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）后的血糖水平（圖1B），并通過腹腔胰島素耐量試驗（ITT）顯示胰島素敏感性得到改善（圖1C）。這些葡萄糖耐量和胰島素敏感性的變化，早于兩組體重差異出現(xiàn)；體重差異僅在治療5周后達(dá)到顯著。與胰島素敏感性改善一致，終點時禁食4小時測得的血漿葡萄糖水平在兩組間無差異（圖1D），而EVT0185處理組的血漿胰島素水平（圖1E）和胰島素抵抗穩(wěn)態(tài)模型評估（HOMA-IR）評分更低（圖1F）。為探究體重增加輕度下降的潛在機(jī)制，研究者在體重差異出現(xiàn)前（第3周）使用代謝籠評估能量平衡變化，發(fā)現(xiàn)與載體對照組相比，EVT0185不影響食物攝入（圖S1E）、能量消耗（圖S1F）或呼吸交換率（圖S1G），提示可能存在其他機(jī)制。

圖1. 在喂食GAN飲食并于室溫飼養(yǎng)的小鼠中，EVT0185改善胰島素敏感性、MASH和纖維化，且不升高血漿甘油三酯

（A）DIN-MASH研究設(shè)計（載體組 n = 9；EVT0185組 n = 10），使用BioRender繪制。
（B）口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）中記錄的禁食血糖值及相對曲線下面積（AUC）。
（C）胰島素耐量試驗（ITT）中記錄的禁食血糖值及相對AUC。
（D–F）（D）禁食血漿葡萄糖、（E）胰島素、（F）計算得到的HOMA-IR。
（G–L）（G）血漿ALT、（H）AST、（I）FFA、（J）膽固醇、（K）甘油三酯、（L）酮體。
（M）代表性肝臟圖片。
（N）肝臟甘油三酯。
（O）代表性肝臟H&E染色圖像。比例尺：200 μm。
（P）組織學(xué)評分（脂肪變性、氣球樣變、炎癥和MASLD活動）。
（Q）代表性肝臟PSR染色圖像。比例尺：200 μm。
（R）3區(qū)竇周纖維化評分。
（S）PSR陽性面積百分比。
數(shù)據(jù)以均值±SEM表示。顯著性檢驗采用非配對t檢驗、Mann-Whitney檢驗（組織學(xué)評分），或雙因素ANOVA后接Sidak檢驗（OGTT、ITT）。n.s.表示不顯著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001。

EVT0185降低了血漿ALT、AST、游離脂肪酸（FFA）和膽固醇，但不影響甘油三酯（圖1G–1K）。EVT0185使血漿酮體升高約4倍（圖1L）。EVT0185處理組小鼠的肝臟外觀看起來脂肪變性減少（圖1M），生化分析也證實肝臟甘油三酯降低（圖1N）。協(xié)方差分析顯示，EVT0185引起的甘油三酯下降與體重?zé)o關(guān)。對H&E染色肝組織切片進(jìn)行組織學(xué)評分發(fā)現(xiàn)，與載體對照組相比，EVT0185處理組小鼠的脂肪變性、炎癥、氣球樣變和代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝病（MASLD）活動評分（MAS）均降低（圖1O、1P）。對苦味酸天狼星紅（PSR）染色肝切片分析顯示，EVT0185處理組的竇周纖維化評分改善（圖1Q、1R），PSR陽性面積降低約50%（圖1S）。總體而言，這些數(shù)據(jù)表明，在喂食GAN飲食26周的小鼠中，EVT0185能夠降低胰島素抵抗、血漿膽固醇、MASH和纖維化，且不會升高血漿甘油三酯。

另一種快速建立MASH和肝纖維化的模型，是在1周內(nèi)給小鼠喂食含60%高脂、1.25%膽固醇和0.5%膽酸的飲食，并在飲水中加入2%的2-羥丙基β-環(huán)糊精（HFCC + CDX飲食）。完成1周飲食干預(yù)后，小鼠被隨機(jī)分配至載體組或EVT0185組；另設(shè)一組普通飼料喂養(yǎng)小鼠并給予載體，作為健康對照（圖S1H）。與載體相比，EVT0185不改變體重，也不改變血漿ALT、AST或甘油三酯水平，但可降低血漿低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、C反應(yīng)蛋白（CRP）和血清淀粉樣蛋白A（SAA），并升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）（表S1）。肝臟組織學(xué)評估顯示，與載體處理的HFCC + CDX小鼠相比，EVT0185降低了脂肪變性（圖S1J）、炎癥（圖S1K）和MASLD活動評分（圖S1L），并使這些指標(biāo)降至與健康普通飼料對照組無顯著差異的水平。用于顯示膠原沉積的天狼星紅（SR）肝染色顯示，纖維化評分（圖S1N）和SR陽性面積（圖S1O）均下降。與載體對照組相比，EVT0185還降低了α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）陽性面積；α-SMA是HSC活化的標(biāo)志（圖S1P、S1Q）。EVT0185還降低肝臟FFA和膽固醇（圖S1R、S1S）。與組織學(xué)上炎癥和纖維化降低一致，EVT0185降低了全肝中若干炎癥標(biāo)志物（Il1b、Ccl2、Il6、Nfkb1、Tlr4和Tnfα）以及纖維化標(biāo)志物（Tgfβ1和Col1a1）的mRNA表達(dá)（圖S1T、S1U）。因此，在這一快速飲食誘導(dǎo)MASH模型中，EVT0185治療可降低肝脂肪變性、炎癥和纖維化，同時降低血漿LDL-C和CRP/SAA。

EVT0185在兩個熱中性MASH小鼠模型中降低MASH和胰島素抵抗（圖2）

將雄性小鼠飼養(yǎng)于熱中性環(huán)境（29°C），并喂食高脂（40%）、高果糖（20%）以及含生理相關(guān)水平膽固醇（0.01%）的MASH飲食，能夠模擬人類MASH的時間進(jìn)程、病理學(xué)和轉(zhuǎn)錄組特征。該模型稱為熱中性MASH（TN-MASH）模型，不同于其他在室溫下飼養(yǎng)小鼠并通過高膽固醇飲食誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的MASH模型，例如前述DIN-MASH模型（GAN飲食）或HFCC + CDX飲食模型。這一區(qū)別很重要，因為熱中性飼養(yǎng)可降低靜息能量消耗，并消除誘導(dǎo)纖維化時對高水平膳食膽固醇的需求；高膽固醇飲食會抑制膽固醇合成，而膽固醇合成通路在人類MASH中通常上調(diào)。研究者在TN-MASH小鼠中完成了兩項實驗。

在實驗1中，小鼠2周齡時注射二乙基亞硝胺（DEN）以促進(jìn)腫瘤發(fā)生；10周齡時轉(zhuǎn)入熱中性環(huán)境并喂食高脂高果糖飲食，直至32周齡，隨后給予載體或EVT0185處理4周（圖2A）。EVT0185顯著降低了腫瘤負(fù)荷。載體組和EVT0185組體重?zé)o差異。EVT0185降低了血漿葡萄糖（圖2B）、胰島素（圖2C）和ALT（圖2D），并升高血漿酮體（圖2E）。對H&E染色肝切片進(jìn)行組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，EVT0185降低了脂肪變性和氣球樣變（圖2F、2G），但不影響炎癥，最終使MASLD活動評分降低（圖2G）。EVT0185還降低了3區(qū)竇周纖維化（圖2H、2I）和PSR陽性面積（圖2J）。

圖2. EVT0185在兩個熱中性MASH小鼠模型中降低MASH和胰島素抵抗（A）TN-MASH研究設(shè)計（每組 n = 12），使用BioRender繪制。
（B–E）（B）血漿葡萄糖、（C）胰島素、（D）ALT、（E）酮體。
（F）代表性肝臟H&E染色和氣球樣變圖像（橙色箭頭）。比例尺：100 μm。
（G）組織學(xué)評分（脂肪變性、氣球樣變、炎癥和MASLD活動）。
（H）代表性肝臟PSR染色圖像。比例尺：200 μm。
（I）3區(qū)竇周纖維化評分。
（J）PSR陽性面積百分比定量。
（K）慢性TN-MASH研究設(shè)計（每組 n = 7），使用BioRender繪制。
（L–O）（L）血漿ALT、（M）膽固醇、（N）甘油三酯、（O）酮體。
（P）代表性肝臟H&E染色和氣球樣變圖像（橙色箭頭）。比例尺：100 μm。
（Q）組織學(xué)評分（脂肪變性、氣球樣變、炎癥和MASLD活動）。
（R）代表性PSR染色圖像。比例尺：200 μm。
（S）3區(qū)竇周纖維化評分。
（T）PSR陽性面積百分比定量。

數(shù)據(jù)以均值±SEM表示。顯著性檢驗采用非配對t檢驗或Mann-Whitney檢驗（組織學(xué)評分）。n.s.表示不顯著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001。

在實驗2中，小鼠未注射DEN，但接受相同MASH飲食并在熱中性環(huán)境中飼養(yǎng)72周，形成慢性TN-MASH模型，隨后給予載體或EVT0185處理4周（圖2K）。EVT0185降低了腫瘤負(fù)荷。EVT0185不影響體重，但降低血漿ALT（圖2L）和膽固醇（圖2M），不影響血漿甘油三酯（圖2N），同時升高酮體（圖2O）。H&E染色肝切片組織學(xué)檢查顯示，EVT0185降低脂肪變性、氣球樣變、炎癥和MASLD活動評分（圖2P、2Q）。PSR染色分析顯示，EVT0185降低3區(qū)竇周纖維化（圖2R、2S）和PSR陽性面積（圖2T）。這些數(shù)據(jù)說明，在喂食高脂高果糖飲食并處于熱中性環(huán)境的小鼠中，EVT0185可降低血糖和血漿胰島素，并減輕肝脂肪變性和纖維化，且不會升高血漿甘油三酯。

EVT0185在FAT-MASH小鼠模型中逆轉(zhuǎn)纖維化并降低血清甘油三酯（圖3A–3G，圖S2）

FAT-MASH模型從6周齡開始給雄性C57BL/6J小鼠喂食高脂（40%）和高膽固醇（2%）飲食（西方飲食），并在飲水中加入葡萄糖和果糖（糖水），同時每周腹腔注射低劑量四氯化碳（CCl4）。該處理可誘導(dǎo)明顯的肝脂肪變性、炎癥和纖維化，并具有許多人類MASH的病理學(xué)和轉(zhuǎn)錄組特征。隨后，小鼠在繼續(xù)維持西方飲食并接受CCl4注射的同時，給予載體或EVT0185處理11周（圖3A）。與載體對照組相比，EVT0185不影響體重、肝臟或脾臟重量、血清ALT或膽固醇（表S2）。EVT0185降低了肝臟和血清甘油三酯（圖3B、3C）。H&E染色肝切片的組織學(xué)分析顯示，EVT0185降低脂肪變性、氣球樣變和炎癥評分，從而使MASLD活動評分整體下降約4分（圖3D、3E）。關(guān)鍵的是，與載體相比，EVT0185使PSR陽性面積降低超過50%；與治療開始前（基線）觀察到的纖維化水平相比，降低了38%（圖3F、3G）。羥脯氨酸是膠原的重要組成部分，可作為膠原沉積和纖維化的指標(biāo)；與載體相比，EVT0185也降低了羥脯氨酸水平（圖S2A）。這些數(shù)據(jù)表明，在FAT-MASH模型中，EVT0185可逆轉(zhuǎn)MASH和纖維化，并同時降低血清甘油三酯。

圖3. EVT0185在FAT-MASH和CCl4處理小鼠中降低纖維化，該作用不依賴脂肪變性降低

（A）FAT-MASH研究設(shè)計（基線 n = 5，載體組 n = 10，EVT0185組 n = 10，除非另有說明），使用BioRender繪制。
（B）肝臟甘油三酯。
（C）血清甘油三酯。
（D）代表性肝臟H&E染色圖像。比例尺：200 μm。
（E）組織學(xué)評分（脂肪變性、氣球樣變、炎癥和MASLD活動）。
（F）代表性肝臟PSR染色圖像。比例尺：400 μm。
（G）PSR陽性面積定量。
（H）尿檸檬酸/肌酐比值（載體組 n = 5，EVT0185組 n = 5）。
（I）CCl4-普通飼料研究設(shè)計（每組 n = 4–10），使用BioRender繪制。
（J）代表性肝臟PSR染色圖像。比例尺：200 μm。
（K）PSR陽性面積百分比定量。
（L）代表性肝臟α-SMA染色圖像。比例尺：200 μm。
（M）α-SMA陽性面積。
數(shù)據(jù)以均值±SEM表示。顯著性檢驗采用非配對t檢驗、Mann-Whitney檢驗（組織學(xué)評分），或單因素ANOVA后接Dunnett事后檢驗。n.s.表示不顯著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001。

EVT0185增加尿檸檬酸（圖3H，圖S2B–S2C）

在上述MASH模型中，EVT0185同時降低了血漿葡萄糖和胰島素，以及循環(huán)和肝臟甘油三酯。這與ACC抑制劑的觀察結(jié)果形成鮮明對比：ACC抑制劑能夠降低肝臟甘油三酯，卻會升高血清甘油三酯。在DIN-MASH模型中，EVT0185降低體重增加，且該作用與食物攝入或能量消耗下降無關(guān)。那么，哪些機(jī)制可能介導(dǎo)這些效應(yīng)？ACLY抑制會導(dǎo)致肝臟檸檬酸增加，而ACC抑制則會導(dǎo)致乙酰輔酶A增加。不同于乙酰輔酶A不能跨越許多細(xì)胞類型的細(xì)胞膜，檸檬酸可通過檸檬酸轉(zhuǎn)運蛋白由肝細(xì)胞和腎近端小管細(xì)胞分泌。因此，研究者推測，小鼠接受EVT0185處理后，檸檬酸可能被排入尿液。與這一假設(shè)一致，在長期接受EVT0185治療的FAT-MASH小鼠中，尿檸檬酸/肌酐比值較載體組升高（圖3H）。為進(jìn)一步確認(rèn)這一結(jié)果，研究者給喂食普通飼料的健康C57BL/6J小鼠給予EVT0185，并在首次給藥后24小時和6天測定尿檸檬酸/肌酐比值。治療24小時后，載體組與治療組無差異（圖S2B）；但治療6天后，EVT0185處理組的檸檬酸/肌酐比值高于載體組（圖S2C）。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可增加小鼠尿液中的檸檬酸/肌酐比值，這一機(jī)制可能對防止血清甘油三酯升高具有潛在重要性。

EVT0185在無脂肪變性的小鼠模型中降低纖維化進(jìn)展（圖3I–3M，圖S2）

為評估EVT0185是否能夠在不依賴脂肪變性降低的情況下直接抑制HSC活化，研究者在C57BL/6J小鼠中每周3次注射CCl4，持續(xù)3周，同時喂食普通飼料。這一方案已知可誘導(dǎo)HSC活化和增殖，但不會誘導(dǎo)脂肪變性。與此同時，小鼠每日經(jīng)口灌胃給予載體、bempedoic acid（BA）或EVT0185。Semaglutide每兩周一次皮下注射，可單獨使用，也可與EVT0185聯(lián)合使用（圖3I）。EVT0185和BA均升高循環(huán)酮體（圖S2D）。與預(yù)期一致，H&E切片未顯示可檢測的脂肪變性（圖S2E）。與普通飼料對照小鼠相比，載體處理的CCl4小鼠PSR陽性面積增加（圖3J、3K）。BA和semaglutide對PSR陽性面積沒有影響，而EVT0185以及EVT0185聯(lián)合semaglutide均降低PSR陽性面積（圖3J、3K）。肝臟羥脯氨酸檢測（圖S2F）以及α-SMA染色切片分析（圖3L、3M）也得到類似結(jié)果。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可在不依賴脂肪變性變化的情況下減緩纖維化進(jìn)展，提示其可能對HSC具有直接作用。

EVT0185降低肝膽固醇酯、HSC數(shù)量及其活化狀態(tài)（圖4，圖S3，表S3–S6）

在多個不同MASH模型中證實EVT0185具有強(qiáng)效降低肝纖維化的有益作用后，研究者進(jìn)一步探究介導(dǎo)這些作用的潛在機(jī)制。對EVT0185處理的TN-MASH小鼠肝臟進(jìn)行生化分析發(fā)現(xiàn)，糖異生前體草酰乙酸以及脂肪酸氧化變構(gòu)抑制劑丙二酰輔酶A均下降。這與血糖降低、酮體升高以及此前肝細(xì)胞特異性ACLY敲除小鼠中的觀察結(jié)果一致。此外，研究者還觀察到多種膽固醇酯（CEs）降低（表S3）。EVT0185對脂肪酸種類的影響更為復(fù)雜：部分脂肪酸下降，部分上升。具體而言，由SCD1介導(dǎo)棕櫚酸和硬脂酸去飽和而生成的棕櫚油酸（16:2）和亞油酸（18:2）均因EVT0185而升高。其他一些脂肪酸也呈現(xiàn)類似趨勢，例如α-亞麻酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸，這些脂肪酸都是PPAR信號的強(qiáng)激活因子。

隨后，研究者對載體或EVT0185處理的TN-MASH小鼠肝臟中約770個已注釋的纖維化相關(guān)基因進(jìn)行靶向分析。用于轉(zhuǎn)錄組分析的每組8只動物的MAS評分具有整個隊列代表性。與載體對照相比，EVT0185上調(diào)86個基因、下調(diào)170個基因（表S5）。通路圖顯示，與脂質(zhì)種類變化一致，EVT0185主要上調(diào)PPARγ和脂肪酸氧化通路（圖S3A）。然而，在治療暴露窗口內(nèi)，EVT0185體外報告基因?qū)嶒炍达@示其對PPAR活性有直接影響（表S6），提示這些效應(yīng)很可能是脂質(zhì)代謝物變化的繼發(fā)結(jié)果。該分析中下調(diào)最明顯的通路包括膽固醇代謝、肌成纖維細(xì)胞調(diào)控、膠原合成和細(xì)胞因子信號，提示EVT0185可能直接作用于HSC。

為更精細(xì)地評估EVT0185對HSC的潛在直接作用，研究者對載體或EVT0185處理的FAT-MASH小鼠肝臟進(jìn)行了空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析（圖3A–3I）。利用Mmp7、Dcn、Igfbp7、Col3a1、Col1a1和Lum等HSC既定標(biāo)志物，研究者在載體組和EVT0185組中識別出HSC群體（圖4A–4C）。研究者還觀察到一類肌成纖維細(xì)胞群體，該群體來源于駐留HSC的活化和增殖，并以Ltbp2、Mfap4、Lum、Cpxm2、Dcn、Col1a2、Col3a1、Dpt、Col1a1、Gpx3、Igfbp7和Gas6等ECM相關(guān)基因高表達(dá)為特征（圖4A–4C）。這些細(xì)胞的位置與其預(yù)期作用一致：肌成纖維細(xì)胞位于血管周圍，而HSC則彌散分布于整個肝臟（圖4D）。與纖維化減少一致，EVT0185降低了HSC和肌成纖維細(xì)胞的比例（圖4E），并降低HSC標(biāo)志基因（Col1a1、Col1a2和Col3a1）以及肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志基因（Ltbp2、Mfap4、Lum、Col1a1、Col1a2和Col3a1）的表達(dá)（圖4F）。HSC和成纖維細(xì)胞的差異表達(dá)基因分析顯示，上調(diào)最明顯的通路為脂肪酸代謝過程（圖4G、4H）。進(jìn)一步考察HSC和肌成纖維細(xì)胞中的脂肪酸分解代謝基因后發(fā)現(xiàn)，其基因表達(dá)特征與固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）及SREBP2靶基因升高一致（圖S3B、S3C）。此外，肉堿酰基轉(zhuǎn)移酶（Crat）和過氧化物酶體生物發(fā)生因子5（Pex5）也升高，這兩條通路對維持乙酰輔酶A至關(guān)重要。許多肝細(xì)胞群體中也觀察到類似變化（圖S3B、S3C）。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可誘導(dǎo)一種與HSC活化和增殖標(biāo)志物下降相關(guān)的基因特征。

圖4. 空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)顯示EVT0185降低FAT-MASH小鼠中HSC數(shù)量和活化狀態(tài)

（A）聚類分析，顯示載體或EVT0185處理肝臟中的細(xì)胞類型數(shù)量。
（B）UMAP harmony整合分析，突出顯示HSC和成纖維細(xì)胞群體。
（C）標(biāo)記HSC和成纖維細(xì)胞的基因特征。
（D）聚焦HSC和成纖維細(xì)胞的聚類分析，顯示EVT0185處理小鼠中HSC和成纖維細(xì)胞減少。
（E）HSC和成纖維細(xì)胞百分比。
（F）比較載體處理與EVT0185處理后HSC和成纖維細(xì)胞的基因特征。
（G）火山圖顯示EVT0185處理小鼠與載體處理小鼠HSC中的失調(diào)基因。
（H）基因-概念網(wǎng)絡(luò)圖，顯示基于EVT0185處理與載體處理小鼠HSC之間差異表達(dá)基因得到的相應(yīng)基因本體（GO）術(shù)語。

EVT0185抑制HSC增殖通路并增強(qiáng)氧化代謝（圖5）

為進(jìn)一步強(qiáng)化空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)所得結(jié)論，研究者還對FAT-MASH小鼠肝臟進(jìn)行了單細(xì)胞RNA測序（scRNA-seq）（圖3A–3I）。與空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析一致，和載體處理小鼠相比，EVT0185處理小鼠中活化HSC（aHSC）的比例降低（圖5A）。scRNA-seq數(shù)據(jù)的降維分析顯示，在肝細(xì)胞和HSC中，載體組與EVT0185組之間存在清晰分離，說明EVT0185對這些細(xì)胞類型中的基因表達(dá)具有強(qiáng)烈影響（圖5B）。

圖5. FAT-MASH小鼠肝臟單細(xì)胞RNA測序分析顯示，EVT0185增加HSC和肝細(xì)胞中的氧化代謝與脂肪酸代謝

（A）EVT0185組與載體組FAT-MASH小鼠中活化HSC比例（每組 n = 3）。p值采用β-二項廣義線性模型計算，該模型以每個重復(fù)樣本中HSC數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)量的比例進(jìn)行建模。
（B）肝細(xì)胞和HSC的降維分析（UMAP）（EVT0185組與載體組）。
（C）肝細(xì)胞中Slc27a2、Acly和Acss2的平均基因表達(dá)。BH校正p值采用Wilcoxon秩和檢驗計算。
（D）aHSC中Slc27a2、Acly和Acss2的平均基因表達(dá)。p值采用Wilcoxon秩和檢驗計算。
（E、F）EVT0185組相較載體組，在aHSC（E）和肝細(xì)胞（F）中顯著富集的Hallmark基因集。
（G、H）aHSC（G）和肝細(xì)胞（H）中的SREBP1、SREBP2和PPARα靶基因。BH校正p值采用Wilcoxon秩和檢驗計算。

EVT0185可由SLC27A2轉(zhuǎn)化為輔酶A硫酯（EVT0185-CoA），這是其競爭性抑制ACLY和ACSS2活性的必要條件。與預(yù)期一致，來自載體處理FAT-MASH小鼠的肝細(xì)胞表達(dá)Slc27A2、Acly和Acss2（圖5C）。重要的是，aHSC中也觀察到類似表達(dá)；有趣的是，EVT0185處理后這些基因表達(dá)還進(jìn)一步升高（圖5C、5D）。對aHSC進(jìn)行基因集富集分析（GSEA）顯示，EVT0185正向富集氧化磷酸化、脂肪酸代謝、過氧化物酶體和膽固醇穩(wěn)態(tài)等Hallmark基因集；同時負(fù)向富集細(xì)胞增殖相關(guān)基因集（Wnt/β-catenin、紡錘體和G2-M檢查點）、細(xì)胞周期與翻譯相關(guān)基因集（E2F靶基因）以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化基因集（圖5E）。在肝細(xì)胞中，脂肪酸代謝和膽固醇穩(wěn)態(tài)方面也觀察到類似趨勢，同時TNFα信號負(fù)向富集（圖5F）。進(jìn)一步分析這些基因集中的基因發(fā)現(xiàn)，在HSC（圖5G）和肝細(xì)胞（圖5H）中，許多經(jīng)充分驗證的SREBP1和SREBP2靶基因上調(diào)，同時Cyp4a14和Cyp4a10（PPARα靶基因）以及Crat和Pex5顯著上調(diào)。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可輕度增加SREBP靶基因；但與ACC抑制劑不同，EVT0185還可上調(diào)促進(jìn)肝細(xì)胞和HSC氧化代謝的重要PPARα靶基因。

EVT0185抑制TGFβ1誘導(dǎo)的人源HSC活化（圖6，圖S4）

在證實EVT0185可在MASH小鼠模型中誘導(dǎo)與HSC抑制一致的轉(zhuǎn)錄特征后，研究者進(jìn)一步測試這一作用是否可延伸至人類樣本。首先，研究者使用來自接受肝細(xì)胞癌腫瘤切除手術(shù)患者的非惡性組織，制備精準(zhǔn)切割肝切片，并檢測EVT0185抑制DNL的效力。患者特征見表S7，肝臟病理顯示6名受試者中有4人在手術(shù)時存在脂肪變性。在載體處理下，DNL速率差異很大；但EVT0185處理使每一對患者肝切片樣本中的DNL均下降，平均降幅約33%（圖6A）。使用相同方法的既往研究已驗證該制備方式具有可行性，不過不同受試者之間的差異可能導(dǎo)致顯著變異。

圖6. EVT0185抑制DNL和TGFβ1誘導(dǎo)的原代人源HSC活化

（A）人肝切片經(jīng)DMSO或EVT0185處理16小時后的從頭脂肪生成（n = 6）。p值采用配對t檢驗。
（B）UMAP圖顯示健康對照或MASLD個體肝臟中的HSC群體（每組 n = 2）。p值來自雙比例z檢驗。
（C）人HSC中SLC27A2的平均基因表達(dá)。BH校正p值采用Wilcoxon秩和檢驗計算（每組 n = 2）。
（D）代表性流式細(xì)胞術(shù)圖像，顯示在載體、TGFβ1或TGFβ1 + EVT0185處理后，原代人HSC中α-SMA抗體陽性細(xì)胞亞群。
（E、F）（E）α-SMA高表達(dá)/α-SMA低表達(dá)細(xì)胞群百分比，以及（F）載體、TGFβ1或TGFβ1 + EVT0185處理后的前膠原1A1生成（n = 3）。
（G、H）相對于載體對照，EVT0185處理的原代人HSC中放射性標(biāo)記乙酸摻入固醇（G）或脂肪酸（H）的情況（每組 n = 3）。
數(shù)據(jù)以均值±SEM表示。顯著性檢驗采用單因素ANOVA后接Dunnett事后檢驗或非配對t檢驗。n.s.表示不顯著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001。

為評估EVT0185在人源HSC中轉(zhuǎn)化為活性輔酶A硫酯的可能性，研究者分析了公開可用的單核RNA測序數(shù)據(jù)，比對健康對照和MASLD患者肝臟中的SLC27A2表達(dá)。該分析發(fā)現(xiàn)，MASLD患者肝臟中HSC比例更高（圖6B），且更重要的是，與健康對照相比，MASLD患者HSC中的SLC27A2表達(dá)更高（圖6C）。隨后，研究者在TGFβ1處理的原代人HSC中評估EVT0185作用。與載體對照相比，TGFβ1處理增加了α-SMA高表達(dá)細(xì)胞群相對于α-SMA低表達(dá)細(xì)胞群的比例（圖6D、6E）。重要的是，EVT0185在很大程度上阻斷了這種TGFβ1誘導(dǎo)的活化（圖6D、6E）。此外，與TGFβ1單獨處理相比，EVT0185處理的TGFβ1活化HSC中前膠原1A1生成減少（圖6F）。與全肝中膽固醇酯下降的觀察一致（表S3），EVT0185降低了由乙酸生成固醇的合成（圖6G），但不降低由乙酸生成脂肪酸的合成（圖6H）。由于巨噬細(xì)胞缺乏SLC27A2，EVT0185未能抑制培養(yǎng)的骨髓來源巨噬細(xì)胞（BMDM）中的炎癥標(biāo)志物（圖S4A、S4B）。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可抑制原代人肝切片和HSC中的DNL，并減少TGFβ1誘導(dǎo)的原代人HSC活化。

EVT0185通過依賴SLC27A2、ACLY和ACSS2的通路抑制HSC活化（圖7，圖S5）

為進(jìn)一步研究EVT0185抑制HSC活化的機(jī)制，研究者需要使用一種易于進(jìn)行基因編輯的系統(tǒng)。LX2細(xì)胞來源于人HSC，經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化，在TGFβ1處理后具有許多活化人HSC的轉(zhuǎn)錄特征。然而，與來自小鼠和人類的HSC不同，LX2細(xì)胞不表達(dá)SLC27A2（圖S5A），這一點與其他永生化細(xì)胞系一致。

為克服這一限制并評估EVT0185在LX2細(xì)胞中的作用，研究者構(gòu)建了兩種細(xì)胞系：一種穩(wěn)定表達(dá)空對照載體（PRP-empty），另一種表達(dá)人SLC27A2（PRP-SLC27A2）（圖7A）。利用這些細(xì)胞系，研究者在培養(yǎng)基中同時存在葡萄糖和乙酸（500 μM）的條件下，測試BA或EVT0185對TGFβ1誘導(dǎo)活化的影響。不同于此前在含葡萄糖但不含乙酸培養(yǎng)基中培養(yǎng)的原代HSC研究，無論是PRP-empty細(xì)胞還是PRP-SLC27A2細(xì)胞，BA處理均未抑制TGFβ1誘導(dǎo)的培養(yǎng)基中前膠原1A1分泌（圖S5B、S5C）。相反，EVT0185降低了PRP-SLC27A2細(xì)胞培養(yǎng)基中的前膠原1A1水平（圖7B），但對PRP-empty細(xì)胞無此作用（圖S5D）。在相同條件下進(jìn)行的PrestoBlue細(xì)胞活力檢測顯示，細(xì)胞活力并未下降，說明EVT0185對前膠原1A1的影響源于活化減少，而非細(xì)胞死亡（圖S5E、S5F）。這些數(shù)據(jù)表明，EVT0185可在葡萄糖和乙酸同時存在時降低TGFβ1誘導(dǎo)的HSC活化，且這一作用依賴SLC27A2。

圖7. EVT0185通過依賴SLC27A2、ACLY和ACSS2的通路抑制HSC活化

（A）轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒（PRP-empty）或表達(dá)SLC27A2質(zhì)粒（PRP-SLC27A2）的LX2細(xì)胞中SLC27A2蛋白表達(dá)。
（B）在PRP-SLC27A2細(xì)胞中，與TGFβ1或TGFβ1 + 不同濃度EVT0185共同處理24小時后，相對于DMSO的人前膠原1A1水平（每組 n = 3）。
（C）WT、shACLY、shACSS2或shACLY + shACSS2敲低細(xì)胞在無TGFβ1（載體）或TGFβ1處理24小時后的人前膠原1A1水平（每組 n = 3）。
（D）表達(dá)WT或ACLY + ACSS2敲低的PRP-SLC27A2細(xì)胞，經(jīng)載體、TGFβ1或TGFβ1 + EVT0185處理24小時后測得的人前膠原1A1水平（每組 n = 6）。
（E）PRP-SLC27A2 WT或ACLY + ACSS2敲低細(xì)胞經(jīng)DMSO或EVT0185處理24小時后，放射性標(biāo)記乙酸摻入固醇或脂肪酸的情況（每組 n = 3）。
（F）韋恩圖比較EVT0185相對于載體在PRP-empty或PRP-SLC27A2細(xì)胞中對差異富集Hallmark基因集的影響。
（G）PRP-SLC27A2表達(dá)細(xì)胞中差異富集Hallmark基因集的散點圖。
（H、I）PRP-SLC27A2表達(dá)細(xì)胞經(jīng)載體、TGFβ1或TGFβ1 + EVT0185處理，并在培養(yǎng)基中加入乙酸或甲羥戊酸內(nèi)酯后，培養(yǎng)基中的人前膠原1A1水平（H）和細(xì)胞增殖率（I）（每組 n = 3）。
數(shù)據(jù)以均值±SEM表示。顯著性檢驗采用單因素ANOVA后接Dunnett事后檢驗，以及雙因素ANOVA后接Tukey或Fisher最小顯著差異事后檢驗。n.s.表示不顯著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001。

與BA相比，EVT0185在乙酸和葡萄糖同時存在時效力更強(qiáng)，這使研究者提出假設(shè)：同時抑制ACLY和ACSS2可能對降低TGFβ1誘導(dǎo)的HSC活化很重要。為直接檢驗這一假設(shè)，研究者構(gòu)建了可誘導(dǎo)短發(fā)夾RNA敲低ACLY（shACLY）、ACSS2（shACSS2）或二者同時敲低（shACLY + shACSS2）的LX2細(xì)胞（圖S5G），并在有或無TGFβ1條件下檢測膠原生成（圖7C）。與BA實驗觀察一致，無論培養(yǎng)基中是否存在乙酸，shACLY對膠原生成的影響都很有限（圖7C左側(cè)兩圖）。相反，shACSS2以及shACLY + shACSS2均顯著降低基礎(chǔ)狀態(tài)和TGFβ1刺激下的膠原生成（圖7C右側(cè)兩圖）；這一差異不能由細(xì)胞活力變化解釋，因為三種基因型中的細(xì)胞活力下降程度相近（圖S5H）。隨后，研究者評估EVT0185在異位表達(dá)SLC27A2并伴有shACLY + shACSS2的LX2細(xì)胞中抑制膠原生成和DNL的作用。結(jié)果顯示，雖然shACLY + shACSS2可降低膠原生成（圖7D）并抑制固醇和脂肪酸合成（圖7E），但EVT0185并未產(chǎn)生額外作用。這些數(shù)據(jù)表明，遺傳性抑制ACLY + ACSS2，或使用EVT0185進(jìn)行藥理學(xué)抑制，均可阻斷LX2細(xì)胞中TGFβ1刺激的膠原生成和DNL。

為評估EVT0185抑制HSC活化的潛在機(jī)制，研究者對經(jīng)TGFβ1刺激并與EVT0185共同處理24小時的LX2細(xì)胞（有或無SLC27A2）進(jìn)行了RNA測序。與SLC27A2重要性的觀察一致，相較PRP-empty細(xì)胞，EVT0185處理PRP-SLC27A2細(xì)胞系后差異表達(dá)基因數(shù)量增加超過7倍（圖7F）。與體內(nèi)空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)和scRNA-seq結(jié)果類似，在EVT0185處理的PRP-SLC27A2細(xì)胞中，相較未處理細(xì)胞，脂肪酸代謝和氧化磷酸化Hallmark基因集最為富集。此外，研究者還檢測到Hedgehog信號以及G2-M檢查點/有絲分裂基因集受到抑制；這些基因集分別對HSC活化和增殖至關(guān)重要（圖7G）。值得注意的是，EVT0185處理LX2細(xì)胞后，膽固醇穩(wěn)態(tài)和膽固醇合成基因集顯著升高，這與FAT-MASH模型中HSC的結(jié)果一致（圖4、圖5）。由于SREBP2靶基因和膽固醇合成/清除基因集大幅升高，而膽固醇對HSC增殖和活化又十分關(guān)鍵，因此研究者推測，補充膽固醇前體如甲羥戊酸內(nèi)酯（100 μM），可能會阻斷EVT0185抑制TGFβ1誘導(dǎo)HSC活化的作用（圖S5I）。與這一假設(shè)一致，加入甲羥戊酸內(nèi)酯后，EVT0185在PRP-SLC27A2細(xì)胞中降低24小時膠原合成（圖7H）和7天細(xì)胞增殖（圖7I）的作用被阻斷；但在PRP-empty細(xì)胞中沒有影響（圖S5J、S5K）。這些數(shù)據(jù)強(qiáng)烈提示，抑制膽固醇合成有助于EVT0185對HSC膠原生成和增殖的抑制作用。

【Citation】:Di Pastena F, Gautam J, Lally JSV, et al. Dual inhibition of ACLY and ACSS2 by EVT0185 reduces steatosis, hepatic stellate cell activation, and fibrosis in mouse models of MASH.Cell Metab.2026;38(1):33-49.e10.

【貢獻(xiàn)】★★★★★

本研究表明，EVT0185通過降低DNL并促進(jìn)脂肪酸氧化來減輕脂肪變性。同時，研究識別出乙酸代謝是HSC活化的重要驅(qū)動因素，并顯示ACSS2對膽固醇合成和膠原生成至關(guān)重要。因此，ACSS2構(gòu)成了抑制肝纖維化的一個核心脆弱環(huán)節(jié)，也使EVT0185區(qū)別于那些不作用于該軸線的其他DNL抑制劑。未來研究應(yīng)在誘導(dǎo)型HSC特異性模型和人肝來源類器官中，結(jié)合同位素示蹤和空間代謝組學(xué)，進(jìn)一步考察EVT0185和ACSS2的作用，以直接闡明這些通路在推動MASH和肝纖維化中的重要性。

研究局限性：雖然EVT0185已在多個互補性小鼠模型中得到檢驗，這些模型能夠復(fù)現(xiàn)人類MASH的關(guān)鍵組織學(xué)和轉(zhuǎn)錄組特征，但它們并不能完全反映人類疾病的慢性和異質(zhì)性。雖然轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和原代人HSC實驗支持EVT0185對星狀細(xì)胞活化具有直接作用，但仍需要在體內(nèi)使用星狀細(xì)胞特異性刪除ACLY和ACSS2的方法來確認(rèn)因果關(guān)系。最后，盡管研究結(jié)果強(qiáng)調(diào)乙酸代謝是星狀細(xì)胞活化和纖維發(fā)生的關(guān)鍵驅(qū)動因素，但本文并未在體內(nèi)直接量化乙酸通量及其對乙酰輔酶A和膽固醇合成的貢獻(xiàn)。未來使用同位素示蹤和細(xì)胞特異性模型的研究，將有助于更細(xì)致地闡明這些機(jī)制。

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