你一定有過這種體驗。深夜的實驗室,離心機嗡嗡轉著,你像個等待開獎的賭徒,緊張地湊到屏幕前,心里默念了三遍「求求了這次一定要成」,儀式感不亞于寺廟求簽。下一秒,你愣住了。
它確實「成了」—— 以一種你完全沒預料到的方式:
條帶彎成了笑臉,細胞排成了愛心,菌落長成了星座圖。
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下面,請欣賞第一屆實驗室非正式藝術展——
*參展作品均由不知名的移液槍手、離心機操作員和培養(yǎng)箱守夜人傾情提供。
你看,共聚焦下的細胞,它阿巴阿巴。
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圖源:小紅書
你看,平板上放飛自我的菌落,網(wǎng)友:眼球菌!瞳孔放大菌!
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圖源:小紅書
下面這位跑膠跑出 6 只 QQ 企鵝的,比較起來倒顯得具象化了。
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圖源:小紅書
而明明是分組加的蛋白,為什么 …… 擱這彈上鋼琴了?
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你是在彈鋼琴嗎? 圖源:小紅書
這些玄學名場面里,有一位常年霸榜的神圖量產之王:Western Blot。
它太經(jīng)典了。經(jīng)典到每個分子生物狗都和它有過一段「明明按 protocol 來了啊」的血淚史。別的實驗翻車還能笑,WB 翻車直接要命 ——
條帶一丑,組會發(fā)抖。
有網(wǎng)友跑出了,電影院五連座 —— 誰懂啊,C 位甚至是個按摩椅!!!
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圖源:小紅書
網(wǎng)友神評:差評,扶手太小了沒法放爆米花
再看著這對「大眼瞪小眼」的怪誕形狀,不禁高唱:「你是我的眼 ~~~陪我領略 ......」
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圖源:小紅書
作者銳評:許嵩,這次我真的在搞原創(chuàng) ~
以為會看到清晰的目的條帶,結果收獲了一對「時尚單品」。
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這位網(wǎng)友你真的冒昧 圖源:小紅書
鴨(雞)or 蛋的起源問題。
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嗯?先有雞還是先有蛋 圖源:小紅書
緊接著網(wǎng)友跟了一個由大到小的「蛋」。
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哦莫 大大大小小小~1234567... 圖源:小紅書
被神奇 WB 條帶苦苦折磨的廣大碩博不禁發(fā)問 ——
所以,我的 WB 到底還有沒有救?
別急。你離一條漂亮的 WB,可能就差一張「對癥下藥」的排查清單。
下面,學霸君將詳細拆解它們的真實成因,并給出真正能落地的解決思路。不燒符紙,不靠玄學,咱們用科學把條帶「正」回來。
NO.1 啞鈴狀條帶
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你別說,什么配重都有呢 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 制膠液未混勻或含雜質,凝膠凝固不均;
2. 蛋白樣本含不溶性雜質。
改進方法:
1. 制膠液充分溶解混勻,凝膠現(xiàn)用現(xiàn)配;
2. 蛋白上樣前離心,取上清。
NO.2條帶彌散
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繃不住了,這都是些啥 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 電泳電壓過低;
2. 轉膜夾松緊不適、電流過大或時間過長產熱致凝膠變形;
3. PVDF 膜濕潤不均、污染或過期,濾紙重復使用,轉膜液配比錯誤或含雜質。
改進方法:
1. 使用新鮮電泳液,調整電壓;
2. 轉膜液新鮮配制并預冷,全程低溫,合理設置電流;
3. 轉膜夾松緊適中,PVDF 膜完好,濾紙不重復使用。
NO.3微笑/哭臉條帶
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笑一笑算了,要不還是哭吧 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 電泳液重復使用或配比錯誤;
2. 凝膠放置過久干燥或凝固不均;
3. 電壓過高。
改進方法:
1. 使用新鮮電泳液(≤3 次),正確配比;
2. 凝膠現(xiàn)用現(xiàn)配,制膠前混勻;
3. 濃縮膠 60-80V,分離膠 80-120V。
NO.4膜上小黑點
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咦 看著頭皮有點發(fā)麻 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 轉膜液或封閉液未充分溶解;
2. PVDF 膜過期或損壞,二抗重復使用;
3. 脫脂奶粉封閉引起非特異性結合。
改進方法:
1. 液體充分溶解后使用;
2. 用新鮮 PVDF 膜,二抗使用 ≤3 次;
3. 必要時改用 BSA 封閉。
NO.5條帶一邊亮一邊暗
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這是所有里面最正常的 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 發(fā)光底物或一抗、二抗不均或覆蓋不足;
2. 轉膜夾過松致轉移不均。
改進方法:
1. 摸索最佳上樣量,發(fā)光液或一抗、二抗充分覆蓋;
2. 轉膜夾松緊適中。
NO.6個別條帶拖尾
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Hello,你是長頭發(fā)了嗎? 圖源:網(wǎng)絡
原因分析:
1. 上樣量過大或一抗?jié)舛冗^高;
2. 蛋白降解或溶解不佳形成聚集體;
3. 分離膠濃度過高、緩沖液 pH 問題或電泳產熱嚴重,蛋白剛開始沒跑下去。
改進方法:
1. 調整上樣量及抗體條件;
2. 冰上提取蛋白,加蛋白酶抑制劑,-80℃ 分裝保存,上樣前離心;
3. 選合適濃度分離膠,用新鮮電泳液,長時間電泳加冰袋控溫。
好啦,看完這些是不是想立刻跑一波 WB 試試水?跑膠前牢記口訣:「樣要勻、液要冷、抗體要專一」,該排查的排查,該優(yōu)化的優(yōu)化。
相信大家的手機相冊里,一定也有「不舍得刪」的實驗神圖 ——是歪成貪吃蛇的 WB 條帶?是長成骷髏臉的細胞?還是小鼠的神奇發(fā)型?
歡迎在評論區(qū)狠狠砸圖,讓我們一起評選本屆「實驗室藝術大賞」的冠軍。點贊最高的那位,我單方面宣布:你就是你們課題組的「實驗畢加索」,下次組會 PPT 記得把這張圖放進去,保準讓導師眼前一亮 。
來吧,評論區(qū)交給你!
題圖來源:圖蟲創(chuàng)意
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