引言

免疫細(xì)胞是癌癥免疫治療的細(xì)胞基礎(chǔ)。對(duì)于T細(xì)胞而言，其抗腫瘤反應(yīng)性由其獨(dú)特的T細(xì)胞受體（TCR）定義，能夠識(shí)別在人類白細(xì)胞抗原（HLA）分子背景下呈現(xiàn)的特定抗原。在生理?xiàng)l件下，如遭遇病原體時(shí)，抗原通過(guò)TCR觸發(fā)T細(xì)胞刺激，導(dǎo)致強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，最終產(chǎn)生能夠穿越組織并清除靶抗原的效應(yīng)淋巴細(xì)胞，以及能夠在抗原再次攻擊時(shí)持續(xù)存在并提供長(zhǎng)期保護(hù)的記憶細(xì)胞。

然而，在天然腫瘤環(huán)境中，盡管有文獻(xiàn)記載T細(xì)胞能夠浸潤(rùn)腫瘤微環(huán)境（TME）并在不同程度上識(shí)別癌細(xì)胞上呈現(xiàn)的表位，但它們通常無(wú)法根除腫瘤細(xì)胞。雖然缺乏反應(yīng)可能部分歸因于腫瘤側(cè)抗原性有限，但對(duì)慢性抗原刺激小鼠模型的研究以及對(duì)免疫學(xué)“熱”人類腫瘤中腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）的表征表明，抗腫瘤T細(xì)胞在癌癥進(jìn)展過(guò)程中會(huì)逐漸獲得功能失調(diào)狀態(tài)，從而使腫瘤能夠免疫逃逸。事實(shí)上，恢復(fù)TME內(nèi)腫瘤特異性T細(xì)胞池的功能一直是現(xiàn)代免疫療法的廣泛焦點(diǎn)，這些療法在過(guò)去十年中改變了癌癥患者的臨床護(hù)理。盡管如此，只有少數(shù)患者能夠?qū)崿F(xiàn)長(zhǎng)期緩解，更好地理解抗腫瘤T細(xì)胞的屬性和動(dòng)態(tài)將是提高我們部署和操控T細(xì)胞抗腫瘤免疫能力的關(guān)鍵。

一、腫瘤微環(huán)境中的TILs

1. T細(xì)胞狀態(tài)

腫瘤部位內(nèi)T細(xì)胞浸潤(rùn)的程度長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是癌癥患者的重要預(yù)后因素，甚至在免疫檢查點(diǎn)阻斷成為癌癥治療武器庫(kù)的組成部分之前就是如此。事實(shí)上，關(guān)于免疫學(xué)“冷”與“熱”腫瘤的簡(jiǎn)單二分法，大量研究一致表明，腫瘤內(nèi)或其邊緣存在T細(xì)胞，或腫瘤內(nèi)檢測(cè)到細(xì)胞毒性活性，與改善的臨床結(jié)局相關(guān)。最近，對(duì)不同癌癥類型中單個(gè)TIL以越來(lái)越精細(xì)的粒度進(jìn)行的表征提供了證據(jù)，表明TME內(nèi)的T細(xì)胞可以存在于一系列不同的表型細(xì)胞狀態(tài)中，每種狀態(tài)由不同程度的分化、細(xì)胞毒性、增殖和干性潛能定義。

在不同腫瘤組織類型中，“熱”TMEs主要被抗原經(jīng)歷過(guò)的CD4?和CD8? T細(xì)胞浸潤(rùn)，這些細(xì)胞源自幼稚前體細(xì)胞在遭遇和識(shí)別其同源抗原后經(jīng)歷活化和分化。在TME內(nèi)捕獲的抗原經(jīng)歷過(guò)的細(xì)胞可大致區(qū)分為記憶T細(xì)胞（TMem 細(xì)胞）和耗竭T細(xì)胞（TEx 細(xì)胞）。TMem細(xì)胞包含異質(zhì)性的淋巴細(xì)胞亞群，具有不同的持久性和產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞后代的能力。處于不同分化階段的TMem細(xì)胞——即干細(xì)胞記憶T細(xì)胞（TSCM 細(xì)胞）、中央記憶T細(xì)胞（TCM細(xì)胞）和效應(yīng)記憶T細(xì)胞（TM細(xì)胞）——也可以在血液、次級(jí)淋巴器官和外周器官中以高頻率發(fā)現(xiàn)。TMem細(xì)胞的特征都在于表達(dá)T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子1（TCF1，由TCF7基因編碼）、穩(wěn)態(tài)細(xì)胞因子受體（如IL-7受體）以及次級(jí)淋巴器官的歸巢受體，盡管表達(dá)水平不同。TMem細(xì)胞通常在生理性免疫反應(yīng)期間產(chǎn)生，當(dāng)激發(fā)性病原體被清除或得到控制時(shí)，這有助于建立一個(gè)持續(xù)存在的抗原特異性T細(xì)胞池，以備在抗原再次攻擊時(shí)發(fā)動(dòng)次級(jí)免疫反應(yīng)。

TME中的第二大類T細(xì)胞的特征是高表達(dá)一組與“耗竭”狀態(tài)相關(guān)的蛋白質(zhì)，即程序性細(xì)胞死亡蛋白1（PD1）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA4）、淋巴細(xì)胞激活基因3（LAG3）、T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白受體3（TIM3）和CD39抗原。這些標(biāo)志物的表達(dá)通常表征處于分化晚期的細(xì)胞，由于TME內(nèi)持續(xù)存在的腫瘤抗原提供的慢性抗原刺激，其細(xì)胞毒功能受到不同程度的損害。這也伴隨著功能適應(yīng)，因?yàn)橥ǔＴ赥Ex細(xì)胞中觀察到趨化因子（如CXCL13）產(chǎn)生的增加。重要的是，在T細(xì)胞活化早期也觀察到類似標(biāo)志物的上調(diào)，表明“耗竭”T細(xì)胞區(qū)室可能潛在地包含處于抗原刺激反應(yīng)不同階段的T細(xì)胞，對(duì)應(yīng)于不同的功能角色。與TMem細(xì)胞相反，具有瘤內(nèi)TEx細(xì)胞表型的TIL克隆很少在循環(huán)中檢測(cè)到，而是局限于其同源抗原豐富的部位。

在TME內(nèi)，慢性抗原刺激通過(guò)由轉(zhuǎn)錄因子胸腺細(xì)胞選擇相關(guān)高遷移率族盒蛋白（TOX）編排的復(fù)雜表觀遺傳和轉(zhuǎn)錄程序，導(dǎo)致效應(yīng)功能的逐漸喪失。慢性刺激（病毒或腫瘤驅(qū)動(dòng)）小鼠模型的研究已清晰地表明，TOX表達(dá)導(dǎo)致終末耗竭T細(xì)胞（TTE細(xì)胞）和祖細(xì)胞耗竭T細(xì)胞（TPE細(xì)胞）的產(chǎn)生。雖然TTE細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄水平顯示效應(yīng)分子（如PRF1和編碼顆粒酶的基因）的產(chǎn)生，但其終末耗竭嚴(yán)重阻礙了它們的細(xì)胞毒性潛能，導(dǎo)致缺乏再生功能性效應(yīng)器能力且易于發(fā)生激活誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的非功能性T細(xì)胞反應(yīng)。即使終末分化，TTE細(xì)胞仍能以抗原依賴性方式增殖，從而解釋了它們?cè)赥ME內(nèi)的數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)，在那里它們可能表現(xiàn)出對(duì)增殖腫瘤細(xì)胞的首次快速（功能失調(diào)的）控制；TTE細(xì)胞區(qū)室也可以由TPE細(xì)胞補(bǔ)充，TPE細(xì)胞代表TEx細(xì)胞的儲(chǔ)備庫(kù)，由于保留了TCF1的表達(dá)，仍然能夠自我更新和分化。雖然TPE細(xì)胞缺乏主要的細(xì)胞毒性特性，但它們有助于再生由終末分化效應(yīng)T細(xì)胞構(gòu)成的防御線。

最后，一部分TEx 細(xì)胞顯示出組織駐留記憶T（TRM）細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄特征。由于TRM細(xì)胞標(biāo)志物，如αE整合素（也稱為CD103）和T細(xì)胞中BLIMP1同源物轉(zhuǎn)錄因子（HOBIT），通常與PD1、CD39和其他耗竭標(biāo)志物共表達(dá)，即使在正常組織中也是如此，因此當(dāng)在TME中發(fā)現(xiàn)時(shí)，我們傾向于將這個(gè)亞群稱為T(mén)RM樣TEx細(xì)胞。雖然很難確定這種細(xì)胞是代表慢性抗原刺激后的TRM細(xì)胞，還是腫瘤內(nèi)TTE細(xì)胞分化的一種變體，但TTE和TRM樣細(xì)胞顯然代表了TIL表型譜系中的一個(gè)連續(xù)體。

2. T細(xì)胞克隆性

雖然CD4?和CD8? T細(xì)胞可以以不同的表型存在于TME中，但它們對(duì)腫瘤導(dǎo)向免疫的確切貢獻(xiàn)最終取決于它們通過(guò)TCR接合接收的主要信號(hào)。TCR賦予T細(xì)胞抗原特異性。在過(guò)去十年中，從全外顯子組或轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)直接測(cè)序或推斷TCR結(jié)構(gòu)的工具已成為多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)或計(jì)算工作的主題。

TME內(nèi)優(yōu)勢(shì)克隆擴(kuò)張的證據(jù)傳統(tǒng)上被用作局部識(shí)別腫瘤抗原的間接證據(jù)。當(dāng)應(yīng)用于基于離散免疫表型標(biāo)志物分離的TILs細(xì)胞亞群時(shí)，對(duì)此類群體進(jìn)行TCR測(cè)序提供了更詳細(xì)理解特定T細(xì)胞狀態(tài)在多大程度上優(yōu)先與TME內(nèi)克隆性T細(xì)胞擴(kuò)張相關(guān)，以及推斷TME內(nèi)T細(xì)胞克隆動(dòng)態(tài)和分化樹(shù)的能力。例如，基于PD1表達(dá)分選的黑色素瘤TILs的TCR測(cè)序顯示，絕大多數(shù)擴(kuò)張的克隆型隔離在耗竭區(qū)室內(nèi)。值得注意的是，大多數(shù)TIL克隆在PD1?或PD1?區(qū)室中表現(xiàn)出非重疊分布，從而表明單個(gè)T細(xì)胞克隆傾向于優(yōu)先獲得耗竭或非耗竭表型。

近年來(lái)，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組分析與scTCR-seq（檢測(cè)配對(duì)的TCR α鏈和β鏈信息）的結(jié)合，為表征TME內(nèi)的克隆型動(dòng)態(tài)提供了前所未有的分辨率。最近對(duì)黑色素瘤TILs進(jìn)行了高分辨率分析，發(fā)現(xiàn)TEx細(xì)胞區(qū)室表現(xiàn)出最低的TCR多樣性，這與高度的瘤內(nèi)克隆擴(kuò)張一致。來(lái)自TEx細(xì)胞的TCR克隆也可以在TPE和TTE細(xì)胞簇中追蹤到，這表明至少在這種腫瘤類型中，這些細(xì)胞狀態(tài)之間存在分化譜系的連續(xù)性。

總體而言，對(duì)T細(xì)胞克隆的組織分布和擴(kuò)張水平的分析表明，TEx TILs是抗原特異性針對(duì)腫瘤抗原的T細(xì)胞的儲(chǔ)存庫(kù)。這并不奇怪，因?yàn)槁钥乖碳た梢援a(chǎn)生觀察到的進(jìn)行性功能障礙，導(dǎo)致獲得TEx細(xì)胞表型，并損害生成能夠在全身再循環(huán)的TMem細(xì)胞池。

3. 定義具有腫瘤特異性反應(yīng)性的TILs

T細(xì)胞克隆型在TME內(nèi)的定位在過(guò)去被認(rèn)為是抗腫瘤特異性的間接證據(jù)。然而，現(xiàn)在有幾項(xiàng)研究證明，大部分TILs缺乏任何抗腫瘤特異性。研究表明，在一大群肺癌和CRC患者中，具有非耗竭表型的CD8? TILs識(shí)別廣泛的病毒表位，源自地方性病毒，如EB病毒、人巨細(xì)胞病毒和流感。由于缺乏激活或耗竭標(biāo)志物以及無(wú)法識(shí)別腫瘤抗原，TME中存在的此類TMem 細(xì)胞被歸類為“旁觀者”。

因此，“真正”抗腫瘤TILs的表征需要與旁觀者區(qū)分開(kāi)來(lái)，即證明T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原的反應(yīng)性才能被歸類為前者。Gros等人和Pasetto等人首先證明，在黑色素瘤中，表達(dá)抑制性受體（如PD1、LAG3和TIM3）的CD8? TILs在純化并在體外用自體腫瘤細(xì)胞挑戰(zhàn)時(shí)，顯示出最高水平的激活、效應(yīng)細(xì)胞因子分泌和靶標(biāo)裂解。這表明，盡管具有耗竭表型，這些細(xì)胞仍保留了一定水平的功能能力。

在TME中檢測(cè)到如此大量的病毒特異性旁觀者T細(xì)胞提出了一個(gè)尚未解決的問(wèn)題：它們是如何以及為何被招募到TME的。推測(cè)旁觀者招募可能以抗原非依賴性方式發(fā)生，另外不能排除，一旦到達(dá)那里，它們可能在炎癥信號(hào)的觸發(fā)下，通過(guò)間接和TCR非依賴性激活潛在地參與抗腫瘤活性。

4. 探究TIL TCRs的抗腫瘤反應(yīng)性

一系列深入研究一致證明，實(shí)體瘤中的腫瘤特異性T細(xì)胞幾乎完全存在于TEx細(xì)胞區(qū)室中，在不同腫瘤類型中共享非常相似的轉(zhuǎn)錄和表型特性。此外，由于這些研究評(píng)估了跨不同抗原類別的腫瘤反應(yīng)性，因此可以得出結(jié)論，是腫瘤表達(dá)抗原的特異性，而不是抗原類別本身，驅(qū)動(dòng)了TME內(nèi)的T細(xì)胞耗竭。腫瘤反應(yīng)性TILs的特征現(xiàn)在越來(lái)越多地用于預(yù)測(cè)腫瘤活檢中推定的腫瘤反應(yīng)性TILs：在TILs中檢測(cè)PD1和CD39的表面表達(dá)可以整合到臨床分析中，以量化可能對(duì)腫瘤抗原特異性的T細(xì)胞。TILs水平的評(píng)估已越來(lái)越多地被用作許多具有高腫瘤突變負(fù)荷的實(shí)體瘤的預(yù)測(cè)指標(biāo)，因?yàn)樗c免疫治療后改善的結(jié)局相關(guān)。

另外，應(yīng)對(duì)CD4? TILs進(jìn)行單獨(dú)考慮。相對(duì)較少的研究關(guān)注輔助T細(xì)胞，但單細(xì)胞測(cè)序和TILs反應(yīng)性篩選的廣泛使用現(xiàn)在提供了證據(jù)，表明它們對(duì)私有新抗原和腫瘤相關(guān)抗原都具有特異性，并將它們與意想不到的豐富T細(xì)胞狀態(tài)聯(lián)系起來(lái)，包括細(xì)胞毒性TEx、TPE和TTE細(xì)胞。研究表明，黑色素瘤特異性CD4? T細(xì)胞可以在TME中被抗原呈遞細(xì)胞間接激活，這些細(xì)胞從凋亡的癌細(xì)胞中攝取腫瘤抗原，并在HLA II類背景下呈遞它們。令人驚訝的是，CD4? TILs也可以直接識(shí)別黑色素瘤細(xì)胞，并顯示出細(xì)胞毒性特性。此外，雖然腫瘤特異性Treg細(xì)胞TCRs可以被癌細(xì)胞刺激，但目前尚不清楚腫瘤細(xì)胞是否能誘導(dǎo)具有免疫抑制功能的CD4? TILs，或者更可能通過(guò)抗原模擬來(lái)招募預(yù)先存在的Treg細(xì)胞。未來(lái)的研究將需要評(píng)估腫瘤特異性Treg細(xì)胞如何在TME內(nèi)或外分化。

二、通過(guò)免疫療法操控T細(xì)胞

癌癥免疫療法旨在增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)抗腫瘤的能力，但每種免疫治療方法以不同的方式利用抗腫瘤T細(xì)胞的獨(dú)特屬性。首先，免疫療法可以直接或間接影響治療前預(yù)先存在于TME內(nèi)的腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的功能，促進(jìn)它們的恢復(fù)活力，從而在TME內(nèi)或腫瘤外部位（淋巴結(jié)、外周血或正常組織）放大抗腫瘤反應(yīng)。或者，免疫療法可能通過(guò)從頭產(chǎn)生尚未被TME內(nèi)慢性暴露于腫瘤抗原所耗竭的新T細(xì)胞特異性來(lái)引發(fā)新的T細(xì)胞反應(yīng)。免疫療法期間由T細(xì)胞引發(fā)的癌細(xì)胞死亡所釋放的腫瘤抗原可能進(jìn)一步放大預(yù)先存在和新生T細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)度和廣度。總體而言，不同的免疫療法在它們可以靶向的抗原特異性數(shù)量以及它們重寫(xiě)T細(xì)胞表型和克服耗竭的能力方面彼此不同。

1. 免疫檢查點(diǎn)阻斷

ICB代表了實(shí)體瘤惡性腫瘤最廣泛使用的免疫治療方法，越來(lái)越多的靶向不同抑制性受體的單克隆抗體進(jìn)入臨床領(lǐng)域。靶向PD1、CTLA4和LAG3的抗體已被FDA批準(zhǔn)用于治療幾種不同的實(shí)體瘤類型。雖然ICB已被證明即使在轉(zhuǎn)移性疾病的挑戰(zhàn)性背景下也能誘導(dǎo)客觀反應(yīng)，但只有少數(shù)患者（估計(jì)<30%）實(shí)現(xiàn)持續(xù)和/或完全的臨床反應(yīng)。因此，理解ICB治療后有效抗腫瘤免疫反應(yīng)的免疫學(xué)相關(guān)性仍然至關(guān)重要。

直觀上，ICB被認(rèn)為主要通過(guò)“細(xì)胞毒性恢復(fù)”過(guò)程作用于TME內(nèi)耗竭的抗腫瘤T細(xì)胞，恢復(fù)它們的功能。為此，腫瘤特異性T細(xì)胞需要：（1）在ICB啟動(dòng)前已經(jīng)存在于TME內(nèi)；（2）盡管耗竭，仍保留殘余的細(xì)胞毒性功能，可以通過(guò)消除抑制信號(hào)來(lái)解鎖和釋放。TIL恢復(fù)活力的直接證明需要在治療期間實(shí)時(shí)測(cè)量腫瘤內(nèi)細(xì)胞毒性分子的釋放，這在人類樣本中不可行，但有幾項(xiàng)研究報(bào)告了治療前TME T細(xì)胞浸潤(rùn)程度（反過(guò)來(lái)與腫瘤突變負(fù)荷相關(guān)）與臨床反應(yīng)之間的關(guān)聯(lián)。此外，在抗PD1應(yīng)答的腫瘤中觀察到高頻率的TRM樣TEx TILs。

除了其局部活性外，ICB（在抗PD1阻斷后最廣泛地表征）還被發(fā)現(xiàn)通過(guò)從外周動(dòng)員和招募新的TCR克隆型到腫瘤部位而發(fā)揮全身作用，這種現(xiàn)象稱為“克隆替代”。在非黑色素瘤皮膚癌中，TCR克隆的縱向追蹤顯示，約70%的ICB后克隆性擴(kuò)張的TILs在輔助治療前的TME內(nèi)無(wú)法檢測(cè)到。新檢測(cè)到的克隆具有優(yōu)先的TEx細(xì)胞狀態(tài)。

最后，在一些NSCLC和黑色素瘤患者中，TIL克隆組成在ICB治療期間沒(méi)有發(fā)生劇烈變化，相反，在有反應(yīng)的患者中，預(yù)先存在的克隆恢復(fù)到TPE樣細(xì)胞狀態(tài)，其特征是CXCL13陽(yáng)性和抑制性受體低表達(dá)。這種稱為“克隆復(fù)興”的機(jī)制可能部分歸因于TME內(nèi)預(yù)先存在的腫瘤特異性TPE TILs的局部擴(kuò)張和分化，部分歸因于從腫瘤外生態(tài)位（特別是淋巴結(jié)）招募新的非耗竭前體細(xì)胞，這些細(xì)胞在ICB抗體存在的情況下，由于抑制性腫瘤信號(hào)的破壞，可以分化為功能性效應(yīng)器。在這兩種情況下，抗腫瘤反應(yīng)的恢復(fù)活力是由能夠再生功能性細(xì)胞毒性TILs的TPE細(xì)胞前體數(shù)量增加所促進(jìn)的。

應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，上述ICB反應(yīng)機(jī)制并非相互排斥，而是可能代表治療后不同時(shí)間階段發(fā)生的互補(bǔ)甚至協(xié)同事件。對(duì)于所有機(jī)制，其療效可能取決于TME內(nèi)或外天然T細(xì)胞區(qū)室的質(zhì)量。在這個(gè)框架內(nèi)，對(duì)ICB的反應(yīng)可以被概念化為一個(gè)多步驟過(guò)程，其中細(xì)胞毒性恢復(fù)喚醒了抗腫瘤T細(xì)胞的初始即時(shí)波，這種現(xiàn)象在具有高腫瘤突變負(fù)荷和TRM樣TILs活躍浸潤(rùn)的腫瘤中更為突出。然后，第二波抗腫瘤免疫可能通過(guò)從腫瘤外部位招募新的T細(xì)胞特異性而引發(fā)。克隆替代預(yù)計(jì)會(huì)促進(jìn)ICB反應(yīng)，特別是在具有低至中度T細(xì)胞浸潤(rùn)的腫瘤中，并且可能被表位擴(kuò)散進(jìn)一步放大。最后，克隆復(fù)興將是最慢顯現(xiàn)的，因?yàn)樗枰猅PE細(xì)胞的逐漸積累和分化。

2. 癌癥疫苗

癌癥疫苗旨在通過(guò)選擇性富集針對(duì)預(yù)定義腫瘤抗原集的T細(xì)胞反應(yīng)性，來(lái)促進(jìn)抗腫瘤反應(yīng)的恢復(fù)活力和引發(fā)。事實(shí)上，通過(guò)增加抗原呈遞細(xì)胞介導(dǎo)的癌癥抗原呈遞，疫苗接種既可以增強(qiáng)預(yù)先存在的腫瘤反應(yīng)，也可以啟動(dòng)T細(xì)胞前體的從頭分化，“引導(dǎo)”抗腫瘤免疫反應(yīng)的特異性朝向特定的免疫原性抗原。

幾項(xiàng)研究通過(guò)追蹤循環(huán)T細(xì)胞對(duì)靶向抗原的反應(yīng)性，調(diào)查了癌癥疫苗如何影響T細(xì)胞譜系。對(duì)接受基于新抗原或腫瘤相關(guān)抗原疫苗治療的黑色素瘤、膀胱癌和NSCLC患者的開(kāi)創(chuàng)性研究記錄了針對(duì)疫苗配方中包含的表位的CD4?和CD8? T細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)勁誘導(dǎo)，這些反應(yīng)在治療前未檢測(cè)到或水平很低，從而正式證明癌癥疫苗既能引發(fā)新的反應(yīng)，又能放大預(yù)先存在的反應(yīng)。從這些試驗(yàn)中，高達(dá)60-70%的預(yù)測(cè)新抗原能夠誘導(dǎo)反應(yīng)性T細(xì)胞。有趣的是，雖然疫苗接種方案旨在引發(fā)CD8? T細(xì)胞，但反應(yīng)主要包括多克隆CD4? T細(xì)胞，這可能是由于長(zhǎng)免疫原性抗原在抗原呈遞細(xì)胞的HLA II類分子上的加工和呈遞所促進(jìn)的。

雖然腫瘤抗原特異性T細(xì)胞克隆型可以通過(guò)疫苗接種誘導(dǎo)，但它們的直接抗腫瘤能力僅在有限數(shù)量的患者中得到證明。在這種背景下，評(píng)估針對(duì)未包含在疫苗平臺(tái)內(nèi)的腫瘤抗原的T細(xì)胞反應(yīng)性，提供了間接測(cè)量該方法抗腫瘤功效的獨(dú)特機(jī)會(huì)；事實(shí)上，非疫苗特異性T細(xì)胞只有在表位擴(kuò)散后，當(dāng)腫瘤抗原因腫瘤細(xì)胞裂解而變得更可用時(shí)，才能被擴(kuò)增。在黑色素瘤、NSCLC和膀胱癌中，基于新抗原的疫苗接種試驗(yàn)記錄了治療后的表位擴(kuò)散，出現(xiàn)了針對(duì)多種新抗原或腫瘤相關(guān)抗原的特異性，這些抗原不存在于疫苗配方中，且在疫苗接種前也未檢測(cè)到。這種現(xiàn)象與改善的無(wú)進(jìn)展生存期相關(guān)，從而證明腫瘤特異性T細(xì)胞譜系廣度的增加有助于疾病控制。值得注意的是，表位擴(kuò)散及其在TME內(nèi)衍生的免疫反應(yīng)的確切規(guī)模和時(shí)機(jī)仍然未知，因?yàn)槟壳暗拇蠖鄶?shù)研究主要集中在分析駐留在外周血的抗原特異性細(xì)胞。

3. 過(guò)繼性T細(xì)胞療法

過(guò)繼性T細(xì)胞療法旨在從數(shù)量和質(zhì)量上增強(qiáng)抗腫瘤免疫。這可以通過(guò)兩種方式實(shí)現(xiàn)：（1）在體外擴(kuò)增預(yù)先存在的、具有由其內(nèi)源性TCR譜系提供的抗腫瘤特異性的T細(xì)胞（TIL療法）；或（2）通過(guò)基因操作，用抗腫瘤TCRs或嵌合抗原受體在體外重定向T細(xì)胞的特異性，從而刺激新的抗腫瘤反應(yīng)。

TIL療法的一個(gè)主要優(yōu)勢(shì)是其多克隆性：對(duì)輸注的TIL批次的分析一致表明，TIL產(chǎn)品包含廣泛的T細(xì)胞特異性，包括腫瘤相關(guān)抗原、新抗原和致癌病毒蛋白。雖然TIL療法代表了ACT發(fā)展的一個(gè)里程碑，但它受到腫瘤內(nèi)預(yù)先存在抗腫瘤T細(xì)胞的要求的限制，這些T細(xì)胞的數(shù)量可能不足以滿足所有患者，特別是在腫瘤突變負(fù)荷低于黑色素瘤的腫瘤類型背景下。為了克服這一限制，許多小組專注于基因操作，以重定向T細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的特異性，形式為工程化TCRs或CARs。

CARs的出現(xiàn)徹底改變了ACT領(lǐng)域，因?yàn)榇祟悩?gòu)建體能夠以HLA非依賴性方式靶向表面腫瘤蛋白。這種ACT方法通常只有在識(shí)別出在腫瘤細(xì)胞上具有高、廣泛和保守表達(dá)的表面蛋白時(shí)才可行。迄今為止，這對(duì)于實(shí)體瘤來(lái)說(shuō)一直具有挑戰(zhàn)性，部分原因還在于它們高度的瘤內(nèi)克隆異質(zhì)性和免疫抑制潛力。

CAR-T細(xì)胞持續(xù)的臨床反應(yīng)也取決于基因修飾T細(xì)胞的持久性水平。一些研究提供的證據(jù)表明，體外制造方案富集具有TMem細(xì)胞特征的抗腫瘤T細(xì)胞與體內(nèi)T細(xì)胞持久性和疾病控制相關(guān)，而那些富集抗腫瘤TEx 細(xì)胞的方則在輸注給患者后T細(xì)胞適應(yīng)性較差。

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結(jié)語(yǔ)

TIL表征明確證明腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞存在于TME內(nèi)，然而耗竭仍然是限制其抗腫瘤潛力的主要因素。但是，并非所有TEx細(xì)胞都相同，預(yù)先存在的TRM樣TEx細(xì)胞和TPE細(xì)胞的存在與免疫治療干預(yù)后改善的臨床結(jié)局相關(guān)，為將它們量化作為反應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物鋪平了道路。盡管有這些發(fā)現(xiàn)，但仍然不清楚在癌癥自然史中，甚至在臨床診斷發(fā)生之前，哪些事件決定了是否存在可用于免疫治療的TRM樣TEx或TPE細(xì)胞池。

毫無(wú)疑問(wèn)，將腫瘤反應(yīng)性與耗竭解耦將是成功免疫治療的關(guān)鍵，無(wú)論哪種類型。全面繪制TME內(nèi)以及跨不同腫瘤組織學(xué)的抗腫瘤特異性和相應(yīng)的T細(xì)胞狀態(tài)，將有助于確定癌癥疫苗接種和/或ACT的最佳靶抗原。隨著T細(xì)胞分析技術(shù)的不斷進(jìn)步及其在人類樣本中的應(yīng)用，我們可以更好地理解成功免疫療法背后的生物學(xué)事件，并將這些發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為新的治療選擇，以在所有癌癥患者中促進(jìn)抗腫瘤T細(xì)胞免疫。

參考文獻(xiàn)：

Dynamics and specificities of T cells in cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 2023 May;23(5):295-316.

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