當(dāng)PCR儀的熒光信號(hào)開始躍動(dòng),數(shù)以億計(jì)的DNA舒展成待擴(kuò)增的完美模板,在這場(chǎng)"魔法秀"中,用的為什么不是蒸餾水,而是2mol/L NaCl溶液?畢竟很多實(shí)驗(yàn)中都要用到物美價(jià)廉的蒸餾水,為什么在這里就不適用呢?
01,為什么不是蒸餾水?
先來說說DNA緩沖液(buffer)的作用。溶解DNA只是最基本的一種作用,DNA可以溶解于很多溶液中,包括那些有機(jī)溶劑。但是,之所以選擇用緩沖液來保存而不是水,主要是防止DNA的降解。
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DNA是帶電的高分子(否則你也無法跑電泳了),所以,對(duì)于帶電的物質(zhì),維持電荷穩(wěn)定才是最關(guān)鍵的,否則就容易降解。
這就是為什么我們會(huì)選擇緩沖液來溶解DNA,因?yàn)榫彌_液里有大量的電荷,且可以維持一個(gè)ph值較為穩(wěn)定的范圍(ph和電的關(guān)系不需要解釋吧?)
02,緩沖液存在的意義
結(jié)合以上的內(nèi)容,你應(yīng)該知道,保存DNA,最關(guān)鍵的因素是
1,ph穩(wěn)定(所以必須用緩沖液)
2,沒有DNA酶
符合以上條件的,且常用的,就是大名鼎鼎的TRIS-HCL緩沖液,成分是Tris(C4H11NO3),HCL。調(diào)整ph一般用的是NaOH和HCL。
而NaCl,就是上述緩沖液的一種成分(HCL+NaOH=NaCL+H2O)。當(dāng)然,如果是短時(shí)間使用,且不需要保存的話,直接用水也沒任何問題。
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最后,附上緩沖液的定義:當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時(shí),有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。英文名是buffer。這個(gè)名字,我覺得是生物試劑里最有趣的一個(gè)。
最后,buffer是一個(gè)很有用的東西,幾乎所有試驗(yàn)都用得到。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的敏感性,如果不緩沖,你可能提不到東西或者提到一堆碎片
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