平行桿地面測(cè)試(The parallel rod floor test)是一種用于研究小鼠共濟(jì)失調(diào)(即缺乏對(duì)肌肉的控制或自主運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)性,如行走或拾取物體時(shí)的情況)的模型。共濟(jì)失調(diào)可以是遺傳性的,也可以是非遺傳性的。導(dǎo)致共濟(jì)失調(diào)的原因包括外部物質(zhì),如酒精、處方藥或麩質(zhì),輻射,維生素B12缺乏,中風(fēng),多發(fā)性硬化癥和腦性癱瘓。最終,影響肌肉協(xié)調(diào)性的損傷可以在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不同區(qū)域被觀察到,這些區(qū)域包括小腦、丘腦、頂葉和脊髓。共濟(jì)失調(diào)還可以通過(guò)其他模型進(jìn)行分析,包括轉(zhuǎn)棒測(cè)試、平衡木測(cè)試或網(wǎng)格測(cè)試,而平行桿底面測(cè)試正是在這些測(cè)試的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。
該測(cè)試通常需要在平行桿上方放置一個(gè)無(wú)底部的丙烯酸腔室。相反,平行桿應(yīng)放置在帶有活動(dòng)監(jiān)測(cè)器的底板上方。這些部件應(yīng)通過(guò)電夾連接。放置在監(jiān)測(cè)器下方的紅外線(IR)/光電池光束用于檢測(cè)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)。該裝置應(yīng)連接到一臺(tái)裝有合適軟件的計(jì)算機(jī)上。此外,研究人員應(yīng)考慮在監(jiān)測(cè)器周圍使用一個(gè)隔音腔室。這個(gè)系統(tǒng)能夠通過(guò)檢測(cè)腳的位置和光束中斷情況,自動(dòng)記錄爪子滑倒的次數(shù)和動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)情況。
實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)先讓小鼠在測(cè)試房間內(nèi)適應(yīng)45至60分鐘,然后將其短暫轉(zhuǎn)移到一個(gè)單獨(dú)的飼養(yǎng)籠中。然后應(yīng)設(shè)置好實(shí)驗(yàn)裝置和軟件。卡門斯和克拉布建議進(jìn)行5分鐘的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)測(cè)試和1分鐘的腳滑錯(cuò)誤記錄,有研究則對(duì)這兩個(gè)參數(shù)都使用了5分鐘的測(cè)試時(shí)間。應(yīng)將動(dòng)物放置在腔室的中心,并立即開(kāi)始測(cè)試。
平行桿地面測(cè)試優(yōu)勢(shì):
與其他共濟(jì)失調(diào)模型不同,這個(gè)測(cè)試不需要強(qiáng)迫動(dòng)物移動(dòng)。此外,它可以與其他神經(jīng)行為評(píng)估同時(shí)進(jìn)行。這是一個(gè)重要的特點(diǎn),因?yàn)檠芯咳藛T已經(jīng)觀察到,不同的測(cè)試分析的是共濟(jì)失調(diào)的不同潛在方面,因此,應(yīng)該進(jìn)行多個(gè)測(cè)試以生成一套完整的數(shù)據(jù)。另外,該測(cè)試已被證明是可靠的,因?yàn)樵诓煌臏y(cè)試變體中結(jié)果都是一致的。重要的是,自動(dòng)分析能夠校正動(dòng)物活動(dòng)的差異,否則這些差異可能會(huì)強(qiáng)烈影響爪子滑倒錯(cuò)誤的測(cè)試結(jié)果。
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Fig1 平行桿地面實(shí)驗(yàn)裝置示意圖
儀器與設(shè)備:
在小鼠身上進(jìn)行平行桿底面測(cè)試所需的設(shè)備主要包括一個(gè)無(wú)底部的丙烯酸腔室,該腔室放置在平行的不銹鋼桿上方。所有尺寸都是可調(diào)節(jié)的。建議腔室的尺寸為15×15×20立方厘米,桿的直徑為1.6毫米。對(duì)于成年小鼠,桿間間距建議為6毫米。這些桿應(yīng)在丙烯酸腔室外用一根與其他桿垂直的單獨(dú)桿子連接起來(lái)。此外,這些桿應(yīng)放置在一塊不銹鋼底板上方,底板尺寸建議為21×21.5厘米,并帶有丙烯酸邊框。框架底部可以有橡膠塞,并且需要在活動(dòng)監(jiān)測(cè)器上方很好地居中放置。底板、平行桿底面和活動(dòng)監(jiān)測(cè)器應(yīng)通過(guò)電夾連接。活動(dòng)監(jiān)測(cè)器也應(yīng)抬高,以便等距分布的紅外線/光電池光束能夠穿過(guò)平行桿底面上方的裝置,這些光束用于檢測(cè)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)。應(yīng)在監(jiān)測(cè)器周圍放置隔音腔室,以盡量減少引入混雜變量。
該裝置能夠自動(dòng)檢測(cè)小鼠的爪子滑倒情況。當(dāng)動(dòng)物的爪子從平行金屬桿之間滑落并接觸到底板時(shí),運(yùn)行合適軟件的計(jì)算機(jī)會(huì)記錄并統(tǒng)計(jì)這種接觸情況。
訓(xùn)練方案:
進(jìn)行平行桿地面測(cè)試的實(shí)驗(yàn)方案很簡(jiǎn)單,因此具有很高的可重復(fù)性。與其他神經(jīng)行為評(píng)估一樣,飼養(yǎng)、處理和測(cè)試環(huán)境的所有方面對(duì)于獲得可靠的結(jié)果都至關(guān)重要。
應(yīng)在測(cè)試前45至60分鐘將小鼠轉(zhuǎn)移到測(cè)試房間,使其適應(yīng)環(huán)境。設(shè)置裝置進(jìn)行記錄的時(shí)間應(yīng)比所需的測(cè)試間隔長(zhǎng)。對(duì)于5分鐘的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)測(cè)試和1分鐘的爪子滑倒錯(cuò)誤記錄,總記錄時(shí)間為15分鐘。相反,對(duì)這兩個(gè)參數(shù)都使用了5分鐘的測(cè)試時(shí)間。
在測(cè)試前,應(yīng)稱量小鼠的體重,并將其轉(zhuǎn)移到單獨(dú)的飼養(yǎng)籠中,時(shí)間不超過(guò)10分鐘。如果研究涉及評(píng)估藥物的短期效果,此時(shí)應(yīng)準(zhǔn)備好藥物。
然后應(yīng)將小鼠放置在裝置的中心,啟動(dòng)活動(dòng)監(jiān)測(cè)器并關(guān)閉隔音腔室(如果使用了隔音腔室)后,應(yīng)立即開(kāi)始測(cè)試。
測(cè)試結(jié)束時(shí),應(yīng)將小鼠從腔室中取出,并轉(zhuǎn)移回其原來(lái)的飼養(yǎng)籠中。然后應(yīng)用10%的異丙醇清潔裝置。
如果要評(píng)估藥物的長(zhǎng)期效果,這個(gè)實(shí)驗(yàn)方案可以在隨后的幾天里重復(fù)進(jìn)行。描述了一個(gè)為期3天的方案,用于確定對(duì)乙醇的敏感性。
修改方案:
在測(cè)試前進(jìn)行了為期2天的適應(yīng)期。這是因?yàn)橹坝袌?bào)道稱,小鼠在新裝置中的活動(dòng)存在品系差異。如果在平行桿底面測(cè)試中比較不同的小鼠品系,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定最佳的訓(xùn)練時(shí)長(zhǎng)。重復(fù)測(cè)試可能會(huì)導(dǎo)致某些品系的小鼠活動(dòng)和探索行為減少,而其他品系的小鼠則保持同樣的活躍度。
桿間間距取決于小鼠的大小。對(duì)于非常年幼的小鼠,桿間間距和不銹鋼板上方的高度都需要進(jìn)行調(diào)整。
樣本數(shù)據(jù):
平行桿地面測(cè)試的結(jié)果可以用爪子滑倒的次數(shù)來(lái)表示。然而,鑒于腳滑的次數(shù)與移動(dòng)的距離呈正相關(guān),有研究建議使用損傷比率,該比率考慮了爪子滑倒的次數(shù)和活動(dòng)的差異,因此可以避免偏差。
優(yōu)勢(shì):
與其他共濟(jì)失調(diào)模型,如轉(zhuǎn)棒測(cè)試、平衡木測(cè)試和網(wǎng)格測(cè)試不同,平行桿底面測(cè)試不需要強(qiáng)迫動(dòng)物移動(dòng)。
此外,由于這個(gè)簡(jiǎn)單的測(cè)試不需要長(zhǎng)時(shí)間的適應(yīng)或訓(xùn)練,它可以與其他神經(jīng)行為評(píng)估或其他運(yùn)動(dòng)測(cè)試相結(jié)合。這在運(yùn)動(dòng)研究中尤為重要,因?yàn)椴煌臏y(cè)試可能測(cè)量不同的潛在行為或功能,例如保持平衡的能力或肌肉力量的變化。此外,評(píng)估不同模型中基因型差異的研究表明,不同任務(wù)之間只有適度的相關(guān)性,因此表明共濟(jì)失調(diào)是一種復(fù)雜的特征,需要仔細(xì)和綜合的分析。
與其他共濟(jì)失調(diào)測(cè)試,如轉(zhuǎn)棒測(cè)試不同,平行桿底面測(cè)試在評(píng)估遺傳因素對(duì)乙醇誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)的影響時(shí)顯示出可靠的結(jié)果,因?yàn)槭褂貌煌臏y(cè)試變體時(shí)觀察到了相同的品系差異。
局限性
與其他共濟(jì)失調(diào)模型相比,在這個(gè)測(cè)試中觀察到某些基因型的小鼠具有極高的敏感性。評(píng)估共濟(jì)失調(diào)的復(fù)雜性在于每個(gè)模型只分析運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)的一個(gè)或幾個(gè)方面,實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)包括多種測(cè)試,以獲得更完整的信息。
平行桿地面測(cè)試是一種簡(jiǎn)單可靠的共濟(jì)失調(diào)模型,能夠進(jìn)行自動(dòng)分析。該測(cè)試可以與其他評(píng)估共濟(jì)失調(diào)不同方面的模型相結(jié)合。此外,與其他共濟(jì)失調(diào)測(cè)試不同,它無(wú)需強(qiáng)迫小鼠移動(dòng)就能生成可靠的數(shù)據(jù)。另外,爪子滑倒錯(cuò)誤的結(jié)果會(huì)針對(duì)運(yùn)動(dòng)活動(dòng)的差異進(jìn)行校正,否則這些差異可能會(huì)在結(jié)果中引入偏差。
文獻(xiàn)引用:
1.Coughenour LL, McLean JR, Parker RB (1977) A new device for the rapid measurement of impaired motor function in mice. Pharmacology, biochemistry, and behavior 6:351-353.
2.Gallaher EJ, Parsons LM, Goldstein DB (1982) The rapid onset of tolerance to ataxic effects of ethanol in mice. Psychopharmacology 78:67-70.
3.Kamens HM, Phillips TJ, Holstein SE, Crabbe JC (2005) Characterization of the parallel rod floor apparatus to test motor incoordination in mice. Genes, brain, and behavior 4:253-266.
4.Kamens HM, Crabbe JC (2007) The parallel rod floor test: a measure of ataxia in mice. Nature protocols 2:277-281.
5.Meyer OA, Tilson HA, Byrd WC, Riley MT (1979) A method for the routine assessment of fore- and hindlimb grip strength of rats and mice. Neurobehavioral toxicology 1:233-236.
6.Philibin SD, Cameron AJ, Schlumbohm JP, Metten P, Crabbe JC (2012) Ethanol withdrawal-induced motor impairment in mice. Psychopharmacology 220:367-378.
7.Phillips JP (1975) A note on the scoring of the grid test of schizophrenic thought disorder. The British journal of social and clinical psychology 14:99-100.
8.Wahlsten D, Bachmanov A, Finn DA, Crabbe JC (2006) Stability of inbred mouse strain differences in behavior and brain size between laboratories and across decades. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 103:16364-16369.
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