Introduction

前言

過去三年，mRNA腫瘤疫苗的主戰(zhàn)場集中在兩個方向：成人高突變負(fù)荷腫瘤（以黑色素瘤為代表）和個性化新抗原疫苗（以mRNA-4157/V940為代表）。KEYNOTE-942的陽性數(shù)據(jù)之后，這一賽道的臨床前景已經(jīng)有了初步輪廓。

但另一類問題始終懸而未決：兒童實體瘤能不能走同一條路？

許多兒童實體瘤的突變負(fù)荷普遍低于成人，個性化新抗原策略的適用性受限。這意味著，如果要在兒童實體瘤中推進(jìn)mRNA疫苗，策略重心可能需要轉(zhuǎn)向共享腫瘤相關(guān)抗原（TAA），而不是個體化新抗原；遞送平臺也未必需要延續(xù)LNP路線。

2026年6月發(fā)表于Molecular Therapy: Oncology的一項研究“mRNA vaccination using peptide nanoparticles triggers a strong immune response against endogenous GPC2 in a murine neuroblastoma model”，提供了這個方向上迄今首個公開發(fā)表完整臨床前數(shù)據(jù)的案例。研究團(tuán)隊來自愛爾蘭RCSI醫(yī)科大學(xué)和英國貝爾法斯特女王大學(xué)，靶點是GPC2，遞送平臺是RALA肽納米顆粒，適應(yīng)癥是神經(jīng)母細(xì)胞瘤。

這不是臨床進(jìn)展，是臨床前破冰。但它補(bǔ)上的，是兒童實體瘤mRNA疫苗從無到有的證據(jù)鏈起點。

為什么是GPC2？

靶點選擇是這類研究的第一道邏輯關(guān)卡。

GPC2（Glypican-2）是一種糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白，屬于癌胚抗原，胚胎期廣泛表達(dá)，出生后在正常成體組織中表達(dá)極低，但在多種腫瘤中重新激活。研究者首先借助TCGA等公共數(shù)據(jù)庫的多癌種分析，顯示GPC2在多種腫瘤類型中呈現(xiàn)上調(diào)；隨后在神經(jīng)母細(xì)胞瘤隊列中進(jìn)一步分析（主要來自SEQC數(shù)據(jù)集，n=498）發(fā)現(xiàn)，GPC2高表達(dá)與無事件生存較差、INSS分期更晚、MYCN擴(kuò)增狀態(tài)和高危分組均顯著相關(guān)。

在安全性先驗方面，GPC2成體正常組織表達(dá)極低，且既往GPC2靶向CAR-T已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗（NCT05650749），既往臨床前研究顯示其具備較強(qiáng)抗腫瘤活性，并未觀察到明顯腫瘤外毒性。這為疫苗方向的開發(fā)提供了一定的安全性參照，但并不能直接替代疫苗本身的毒性評估。

從靶點覆蓋面看，GPC2還有一個值得關(guān)注的特征：約40%的神經(jīng)母細(xì)胞瘤存在染色體7q22.1獲得，獨立于MYCN擴(kuò)增狀態(tài)驅(qū)動GPC2上調(diào)。這意味著GPC2靶向策略的潛在覆蓋人群，不局限于MYCN擴(kuò)增亞型。

RALA平臺：一個非LNP遞送路線的完整驗證

遞送平臺的選擇是本研究另一個值得單獨討論的維度。

RALA是一種由精氨酸（R）、丙氨酸（A）、亮氨酸（L）、丙氨酸（A）重復(fù)序列構(gòu)成的兩親性陽離子細(xì)胞穿透肽。在生理pH（7.4）條件下，RALA與核酸自組裝形成納米顆粒，維持隨機(jī)卷曲構(gòu)象；進(jìn)入內(nèi)體酸性環(huán)境后，RALA發(fā)生質(zhì)子化，α螺旋度上升，促進(jìn)內(nèi)體逃逸并釋放mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。

本研究中，RALA/mGPC2在N:P=9配比下的關(guān)鍵理化參數(shù)為：平均粒徑99.07 nm，Zeta電位+26.43 mV，PDI 0.288，封裝效率超過94%（經(jīng)RiboGreen熒光法、瓊脂糖凝膠電泳和離子交換色譜三種方法交叉驗證）。與商業(yè)化脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 3000相比，48小時DC2.4細(xì)胞活力約90%對約20%，細(xì)胞毒性差異顯著。

凍干實驗方面，凍干后顆粒粒徑減小、Zeta電位升高、PDI改善，關(guān)鍵理化參數(shù)仍處于預(yù)設(shè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，提示其在制劑穩(wěn)定性上具有進(jìn)一步開發(fā)價值。但長期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)和規(guī)模化放大工藝的系統(tǒng)評估，尚未在本研究中呈現(xiàn)，還需后續(xù)數(shù)據(jù)支撐。

與LNP相比，RALA平臺有幾個已發(fā)表數(shù)據(jù)支持的特點：不誘導(dǎo)針對載體本身的免疫反應(yīng)（避免抗載體抗體干擾重復(fù)給藥）、對cargo大小和數(shù)量限制相對寬松、合成和純化工藝相對簡單。這些特點在腫瘤疫苗多次給藥場景下具有一定設(shè)計優(yōu)勢，但其與LNP的系統(tǒng)性頭對頭比較數(shù)據(jù)目前并不存在，需要審慎解讀。

先證明疫苗“能工作”：表達(dá)、定位與細(xì)胞毒性

功能驗證在DC2.4樹突狀細(xì)胞系和HEK293細(xì)胞系中同步進(jìn)行。

Western blot顯示，RALA/mGPC2轉(zhuǎn)染后24小時可檢測到GPC2蛋白表達(dá)，72小時回落至基線——瞬時表達(dá)動力學(xué)符合mRNA疫苗的設(shè)計預(yù)期，有助于在抗原呈遞窗口后避免慢性刺激誘導(dǎo)的T細(xì)胞耗竭風(fēng)險。

亞細(xì)胞分級分離實驗確認(rèn)，GPC2蛋白特異性定位于膜組分，細(xì)胞質(zhì)和核組分均未檢出，與GPC2作為GPI錨定蛋白的天然生物學(xué)行為一致。這支持翻譯產(chǎn)物經(jīng)正常分泌通路加工并錨定于細(xì)胞表面，為MHC-I類分子抗原呈遞提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

免疫反應(yīng)是否足夠清晰：GPC2特異性T細(xì)胞被激活

C57BL/6小鼠（Th1型細(xì)胞免疫主導(dǎo)品系，適合評估CTL反應(yīng)為核心的腫瘤疫苗）經(jīng)靜脈注射接受三劑RALA/mGPC2（20 μg/次），末次免疫后21天取脾，以GPC2重疊肽庫體外再刺激，ELISpot評估細(xì)胞因子分泌。

結(jié)果顯示，RALA/mGPC2組的抗原特異性IFN-γ（107.1 SFU/250,000細(xì)胞，p<0.0001）和IL-2（100.6 SFU/250,000細(xì)胞，p<0.001）均顯著高于陽性對照mRNA疫苗組和重組GPC2蛋白免疫組。胞內(nèi)細(xì)胞因子染色顯示CD4?和CD8? T細(xì)胞TNF-α表達(dá)趨勢升高。

記憶T細(xì)胞亞群方面，RALA/mGPC2免疫組CD4? TEM（33.48%，p=0.002）、CD4? TCM（2.11%，p=0.015）、CD8? TEM（50.52%，p=0.015）、CD8? TCM（10.61%，p=0.015）均顯著高于對照。這提示疫苗不僅誘導(dǎo)了一次性炎癥反應(yīng)，而是可能推動了具有再激活潛力的T細(xì)胞狀態(tài)；但其能否真正轉(zhuǎn)化為復(fù)發(fā)控制，還需要更長期、更貼近臨床場景的模型驗證，本研究未設(shè)計長期免疫保護(hù)或復(fù)發(fā)挑戰(zhàn)實驗。

給藥途徑比較方面，靜脈注射較皮內(nèi)注射的IFN-γ和IL-2誘導(dǎo)效能約高3倍，提示全身性抗原分發(fā)至脾臟和淋巴結(jié)的重要性，但最優(yōu)給藥方案在臨床轉(zhuǎn)化中仍需進(jìn)一步探索。

小鼠模型里的治療信號：腫瘤延遲出現(xiàn)，體積下降約70%

皮下植入9464D細(xì)胞（MYCN擴(kuò)增型神經(jīng)母細(xì)胞瘤，C57BL/6背景），腫瘤植入后第11、15、18天靜脈注射RALA/mGPC2，監(jiān)測至第60天。

對照組中位腫瘤體積408.45 mm3，免疫組132.3 mm3，腫瘤體積差異約70%；可觸及腫瘤出現(xiàn)時間延遲10-11天；免疫組生存率更高。血清毒性生物標(biāo)志物（肌酸激酶、肌酐、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶）均在C57BL/6正常參考范圍內(nèi)。

幾處需要說清楚的局限：疫苗編碼人源GPC2，研究者通過BLAST比對確認(rèn)人鼠GPC2序列高度同源并共享MHC預(yù)測表位，支撐了跨物種免疫應(yīng)答邏輯，但人類患者GPC2表位譜的直接驗證仍需獨立數(shù)據(jù)。神經(jīng)母細(xì)胞瘤MHC-I表達(dá)在高危病例中常見下調(diào)或缺失，主要由表觀遺傳機(jī)制介導(dǎo)，作者提出與HDAC抑制劑聯(lián)合使用作為下一步策略，但目前尚無實驗數(shù)據(jù)支持。此外，本研究為單一腫瘤模型、單一給藥方案，免疫方案優(yōu)化和聯(lián)合治療策略均待后續(xù)研究。

從臨床前概念驗證到患者獲益，還有幾道關(guān)口

有幾個維度值得在行業(yè)語境下定位。

遞送平臺多元化的新數(shù)據(jù)點。 當(dāng)前mRNA腫瘤疫苗臨床管線高度依賴LNP，RALA作為肽納米顆粒平臺在已發(fā)表數(shù)據(jù)中積累了DNA/RNA多種cargo的遞送經(jīng)驗，本研究是其在腫瘤mRNA疫苗方向的一次完整臨床前驗證。它與LNP的系統(tǒng)性對比，將是后續(xù)研究的自然問題。

共享TAA策略在兒童腫瘤中的潛力。 GPC2作為在多種兒童和成人腫瘤中高表達(dá)的共享抗原，如果疫苗策略成立，其潛在適應(yīng)癥范圍遠(yuǎn)超神經(jīng)母細(xì)胞瘤單一適應(yīng)癥。研究者也在文中指出這一點，作為后續(xù)擴(kuò)展的依據(jù)。

與CAR-T的平臺協(xié)同問題。 GPC2靶向CAR-T已在臨床，GPC2疫苗與CAR-T在同一靶點上形成的免疫組合，在理論上有互補(bǔ)潛力，但兩者的相互作用（包括抗原逃逸、免疫環(huán)境重塑等）需要明確的實驗設(shè)計來評估，而非直接假設(shè)協(xié)同。

結(jié)語

這項研究真正的價值，不在于宣告一個新的治療選項，而在于它為兒童實體瘤mRNA疫苗的臨床前研究提供了一個可參照的完整證據(jù)框架：靶點選擇邏輯、非LNP遞送平臺驗證、免疫原性評估策略，以及腫瘤控制數(shù)據(jù)的解讀邊界。

mRNA腫瘤疫苗正在從成人高突變腫瘤、個性化新抗原路線，向兒童實體瘤、共享腫瘤相關(guān)抗原和非LNP遞送平臺方向拓展。這項研究是這個擴(kuò)展方向上，目前公開文獻(xiàn)中證據(jù)鏈最完整的臨床前案例之一。

它是臨床前破冰，不是終點。

參考資料

King E, et al. mRNA vaccination using peptide nanoparticles triggers a strong immune response against endogenous GPC2 in a murine neuroblastoma model. Molecular Therapy: Oncology. Vol.34, June 2026.

歡迎來到醫(yī)食參考新媒體矩陣

2023年疫苗接種攻略

陽過了，該怎么打疫苗？最全接種指導(dǎo)手冊來了

來源| RNAScript

校稿| Alice編審| Hide / Blue sea

編輯 設(shè)計| Leon