摘要

為驗證肝腸包-黃金版（以下稱“保肝增免產(chǎn)品組合”）在大口黑鱸肝膽健康管理中的應(yīng)用效果，本試驗以高糖高脂飼料誘導(dǎo)的大口黑鱸肝損傷為模型，分別從提前預(yù)防和損傷后修復(fù)兩個場景進(jìn)行評價。

結(jié)果顯示，高糖高脂飼料會明顯加重魚體肝臟負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致生長速度下降、肝臟顏色變淺、脂肪沉積增加、抗應(yīng)激能力降低，并使魚體在細(xì)菌感染壓力下更容易發(fā)生死亡。采用“肝膽顆粒+肽酶激安+盛冕”保肝增免組合后，整體改善效果更為穩(wěn)定，不僅有助于減輕肝臟損傷、改善肝臟顏色和組織狀態(tài)，還能促進(jìn)魚體恢復(fù)生長、提升抗氧化和抗應(yīng)激能力。

攻毒實驗結(jié)果表明，未進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)的高糖高脂組存活率僅6.67%，而提前使用保肝增免組合進(jìn)行預(yù)防的魚群存活率達(dá)到100%，損傷后進(jìn)行修復(fù)使用的魚群存活率也達(dá)到了80%，而未進(jìn)行治療性干預(yù)的高糖高脂組存活率僅為20%，綜合來看，保肝增免組合更適合作為大口黑鱸高能飼料投喂期、快速生長期、高密度養(yǎng)殖期、高溫季和病害高發(fā)期的周期性保健方案，建議在肝膽問題出現(xiàn)前提前使用，以實現(xiàn)“減輕肝臟負(fù)擔(dān)、穩(wěn)定生長表現(xiàn)、增強(qiáng)抗病能力”的綜合管理目標(biāo)。

1、項目背景與研究意義

大口黑鱸（Micropterus salmoides）生長快、市場認(rèn)可度高，已成為我國重要淡水養(yǎng)殖品種。隨著高密度養(yǎng)殖和高能飼料使用增加，魚體肝臟代謝負(fù)擔(dān)加重，生產(chǎn)中常出現(xiàn)肝臟發(fā)白、脂肪沉積、攝食下降、體況變差和抗病力降低等問題，通常被稱為“肝膽綜合征”或營養(yǎng)性肝損傷。長期高糖高脂投喂會引起肝臟脂質(zhì)蓄積、氧化應(yīng)激和組織損傷，進(jìn)而影響飼料轉(zhuǎn)化、生長整齊度和病原應(yīng)激耐受能力。因此，保肝產(chǎn)品的評價不應(yīng)只看單一指標(biāo)，而應(yīng)結(jié)合生長表現(xiàn)、血清生化、抗氧化能力、組織病理和攻毒結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

本試驗以大口黑鱸為對象，利用高糖高脂飼料建立營養(yǎng)性肝損傷模型，比較肝膽顆粒單用與“肝膽顆粒+肽酶激安+盛冕”保肝增免組合的應(yīng)用效果。試驗同時設(shè)置預(yù)防性添加和治療性添加兩種模式，分別模擬高能飼料投喂期提前保健和肝膽異常出現(xiàn)后修復(fù)干預(yù)的生產(chǎn)場景，以評價該組合產(chǎn)品在減輕肝臟負(fù)擔(dān)、改善生長狀態(tài)和提升病原應(yīng)激耐受能力方面的實際應(yīng)用價值。

2、材料與方法

2.1試驗動物、飼料與受試產(chǎn)品

試驗用大口黑鱸購自健康養(yǎng)殖場，選擇規(guī)格整齊、體表完整、無明顯病灶和異常行為的個體作為試驗對象，初始體重約為10.00±0.50g。正式試驗前在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)2周，以適應(yīng)試驗環(huán)境和基礎(chǔ)飼料。試驗期間每日8:00、12:00和18:00投喂，投喂量根據(jù)攝食情況調(diào)整，以接近飽食且無明顯殘餌為原則。水溫、溶解氧、pH、氨氮和亞硝酸鹽等水質(zhì)指標(biāo)維持在適宜范圍。

試驗設(shè)低糖低脂基礎(chǔ)飼料和高糖高脂模型飼料。受試產(chǎn)品包括肝膽顆粒、肽酶激安和盛冕；肝膽顆粒單用記為GDKL處理，肝膽顆粒、肽酶激安和盛冕聯(lián)合使用記為BGZM處理，由武漢回盛生物科技股份有限公司提供。

2.2試驗設(shè)計與處理流程

試驗設(shè)置正常對照組（D）、高糖高脂模型組（H）、預(yù)防性GDKL組（Y）、預(yù)防性BGZM組（F）、治療性GDKL組（Z）和治療性BGZM組（L）。各組處理見表1。分組時保證初始體重?zé)o顯著差異，各處理設(shè)置相同數(shù)量重復(fù)。

表1 試驗分組及處理設(shè)計

預(yù)防性添加試驗中，H、Y、F組先投喂高糖高脂飼料14天，隨后Y組添加GDKL、F組添加BGZM，連續(xù)添加5天；之后繼續(xù)投喂高糖高脂飼料14天，再進(jìn)行5天產(chǎn)品添加，形成“高糖高脂負(fù)荷—產(chǎn)品添加”的周期性干預(yù)模式。試驗分別于第14天和57天取樣。治療性添加試驗中，H、Z、L組先投喂高糖高脂飼料5周建立肝損傷模型，隨后Z組和L組分別添加GDKL和BGZM1周，H組繼續(xù)投喂高糖高脂飼料，治療結(jié)束后取樣。

圖1 試驗技術(shù)路線

2.3指標(biāo)測定與攻毒試驗

各取樣點禁食后稱量體重和臟器重量，計算條件因子（CF）、特定生長率（SGR）、增重率（WGR）、肝體指數(shù)（HSI）和內(nèi)臟指數(shù)（VSI）。采集尾靜脈血液，分離血清，測定ALT、AST、AKP、ACP、TC和TG。分離肝臟組織制備勻漿，測定MDA、CAT、GSH-Px、T-SOD和T-AOC。另取肝組織進(jìn)行HE、PAS、Masson和油紅O染色，觀察肝細(xì)胞形態(tài)、糖原沉積、膠原沉積和脂質(zhì)沉積情況。預(yù)防性和治療性添加結(jié)束后，分別選擇相應(yīng)組別開展維氏氣單胞菌攻毒試驗。攻毒后連續(xù)觀察7天，記錄攝食、游動、癥狀和死亡情況，統(tǒng)計存活率和藥物保護(hù)效率。

數(shù)據(jù)均以圖表呈現(xiàn)；采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行方差分析、顯著性及相關(guān)性檢驗，計量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean ± SD）表示，P<0.05表示差異顯著。

3、結(jié)果與分析

3.1生長性能與臟器指數(shù)

14天時，H組SGR和WGR低于D組，HSI升高，提示高糖高脂飼料已對生長和肝臟負(fù)擔(dān)產(chǎn)生影響。57天終末時，H組CF、SGR和WGR進(jìn)一步降低，HSI和VSI升高；Y組和F組均有改善，其中F組在提高SGR、WGR和降低HSI、VSI方面更明顯。42天治療組結(jié)果顯示，Z組和L組均可改善損傷后的生長表現(xiàn)和臟器指數(shù)，L組整體優(yōu)于Z組。

圖2 預(yù)防組14天生長數(shù)據(jù)

圖3 預(yù)防組57天生長數(shù)據(jù)

圖4 治療組42 天生長數(shù)據(jù)

3.2血清肝功能與脂質(zhì)代謝

血清ALT和AST主要反映肝細(xì)胞損傷和細(xì)胞膜通透性變化，AKP和ACP與肝膽功能及組織損傷反應(yīng)有關(guān)，TC和TG則用于評價脂質(zhì)代謝狀態(tài)。14天時，H組ALT、AST、AKP、ACP、TC和TG較D組升高，說明模型組已出現(xiàn)血清肝功能和脂質(zhì)代謝異常。57天終末時，H組上述指標(biāo)仍維持較高水平；Y組和F組均可降低相關(guān)指標(biāo)，其中F組對ALT、AST、TC和TG的改善更明顯。42天治療組中，Z組和L組均能降低血清異常指標(biāo)，L組恢復(fù)效果優(yōu)于Z組。

圖5 預(yù)防組14 天血清酶活及脂代謝指標(biāo)

圖6 預(yù)防組57天血清酶活及脂代謝指標(biāo)

3.3肝臟抗氧化與脂質(zhì)過氧化

脂質(zhì)過氧化（測定為MDA）被認(rèn)為是肝臟氧化損傷的生物標(biāo)志物，MDA 水平的升高也代表體內(nèi)自由基造成的損傷程度。14天時，H組MDA升高，T-AOC下降，提示脂質(zhì)過氧化已啟動。57天終末時，H組MDA仍處于較高水平，CAT、GSH-Px、SOD和T-AOC整體處于不利狀態(tài)；Y組可部分改善抗氧化指標(biāo)，F(xiàn)組降低MDA、提高抗氧化酶活性的效果更明顯。42天治療組中，Z組和L組均可改善氧化應(yīng)激狀態(tài)，其中L組表現(xiàn)更優(yōu)。

圖8 預(yù)防組14天肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)

圖9 預(yù)防組57天肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)

圖10 治療組42天肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)

3.4組織病理切片分析

組織病理切片可直接反映肝組織結(jié)構(gòu)損傷。14天時，H組肝組織已出現(xiàn)散在空泡化、細(xì)胞間隙增大及少量脂滴沉積。57天終末時，H組肝細(xì)胞空泡化、組織結(jié)構(gòu)松散、油紅O陽性脂滴增多，并伴隨PAS和Masson異常信號增強(qiáng)；Y組損傷程度減輕，F(xiàn)組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)更完整，脂滴沉積和膠原沉積更少。42天治療組中，Z組和L組均較H組改善，L組組織修復(fù)效果更明顯。

圖11 預(yù)防組14天肝臟HE、PAS、Masson、油紅O染色

圖13 治療組42天肝臟HE、PAS、Masson、油紅O染色

3.5維氏氣單胞菌攻毒保護(hù)效果

維氏氣單胞菌是大口黑鱸及多種淡水魚類的重要條件致病菌，可造成較高死亡率并誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)。攻毒結(jié)果見表2。預(yù)防組中，D組存活率為73.33%，H組僅為6.67%，Y組存活率為53.33%，藥物保護(hù)效率為49.99%；F組存活率為100%，藥物保護(hù)效率為100%。治療組中，D組和H組存活率分別為80.00%和20.00%，Z組存活率為53.33%、藥物保護(hù)效率為41.67%，L組存活率為80.00%、藥物保護(hù)效率為75.00%。綜合來看，BGZM組合在預(yù)防和治療場景下均能提高攻毒后存活率，其中預(yù)防性添加效果更突出。

表2 維氏氣單胞菌攻毒后保護(hù)效果

4、討論

本研究結(jié)果表明，高糖高脂飼料可穩(wěn)定誘導(dǎo)大口黑鱸營養(yǎng)性肝損傷。14天時模型組已出現(xiàn)生長速度下降、肝體指數(shù)升高、血清肝功能和脂質(zhì)代謝異常、MDA升高及輕度組織病理改變；至57天終末階段，生長抑制、肝臟負(fù)擔(dān)、氧化損傷和組織病理變化進(jìn)一步加重。生長性能、血清生化、抗氧化指標(biāo)和組織切片結(jié)果相互印證，說明該模型能夠較好模擬生產(chǎn)中高能飼料長期投喂引起的肝膽問題。

從產(chǎn)品效果看，GDKL單用在預(yù)防和治療場景下均具有一定保肝和修復(fù)作用，可降低部分血清損傷指標(biāo)和氧化應(yīng)激水平，并減輕肝組織空泡化和脂質(zhì)沉積。與GDKL單用相比，BGZM組合在生長恢復(fù)、肝臟負(fù)擔(dān)控制、脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)、抗氧化能力提升和組織保護(hù)方面表現(xiàn)更穩(wěn)定，提示組合產(chǎn)品可能通過保肝、抗氧化、營養(yǎng)支持和免疫調(diào)節(jié)等多環(huán)節(jié)協(xié)同發(fā)揮作用，更適合多重應(yīng)激背景下的大口黑鱸肝膽健康管理。

預(yù)防性和治療性添加均能改善高糖高脂誘導(dǎo)的肝損傷，但預(yù)防性添加效果更突出。攻毒實驗結(jié)果顯示，BGZM預(yù)防組存活率和藥物保護(hù)效率均達(dá)到100.00%，治療組也分別達(dá)到80.00%和75.00%，說明該組合不僅有助于改善肝臟狀態(tài)，還可提高魚體在維氏氣單胞菌應(yīng)激下的耐受能力。

5、結(jié)論

高糖高脂飼料可穩(wěn)定誘導(dǎo)大口黑鱸營養(yǎng)性肝損傷，表現(xiàn)為生長下降、肝臟負(fù)擔(dān)加重、血清肝功能和脂質(zhì)代謝異常、氧化應(yīng)激增強(qiáng)，以及肝組織空泡化、脂質(zhì)沉積和膠原沉積增加。肝膽顆粒單用具有一定保肝和修復(fù)作用，可用于輕中度肝臟負(fù)擔(dān)或早期干預(yù)；保肝增免組合整體效果更優(yōu)，在預(yù)防組和治療組終末均表現(xiàn)出更好的生長恢復(fù)、調(diào)脂、抗氧化和組織保護(hù)作用。

攻毒結(jié)果表明，保肝增免組合可提高大口黑鱸在維氏氣單胞菌應(yīng)激下的存活率和藥物保護(hù)效率。生產(chǎn)上建議將其作為高能飼料投喂期、快速生長期、高密度養(yǎng)殖、轉(zhuǎn)料期、高溫季和病害高發(fā)期的周期性預(yù)防方案；當(dāng)魚群已出現(xiàn)肝臟發(fā)白、攝食下降或肝膽異常時，可作為修復(fù)方案使用，并在恢復(fù)后繼續(xù)銜接預(yù)防性添加。

6、參考文獻(xiàn)

[1]. CHE M 等. Dietary lysophospholipids improves growth performance and hepatic lipid metabolism of largemouth bass (Micropterus salmoides). DOI: 10.1016/j.aninu.2023.04.007.

[2]. FEI S Z 等. A high-fat diet alters lipid accumulation and oxidative stress and reduces the disease resistance of overwintering hybrid yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco♀×P. vachelli♂). DOI: 10.1016/j.aqrep.2022.101043.

[3]. HUANG X 等. A High Starch Diet Alters the Composition of the Intestinal Microbiota of Largemouth BassMicropterus salmoides, Which May Be Associated With the Development of Enteritis. DOI: 10.3389/fmicb.2021.696588.

[4]. LIN S M 等. Effect of high dietary starch levels on growth, hepatic glucose metabolism, oxidative status and immune response of juvenile largemouth bass,Micropterus salmoides. DOI: 10.1016/j.fsi.2018.04.046.

[5]. LU Z 等. Effects of Lysophospholipid Supplementation in Feed with Low Protein or Lipid on Growth Performance, Lipid Metabolism, and Intestinal Flora of Largemouth Bass (Micropterus salmoides). DOI: 10.1155/2022/4347466.

[6]. NEWAJ-FYZUL A 等. Review: developments in the use of probiotics for disease control in aquaculture. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2013.08.026.

[7]. TURCHINI G M 等. Fish oil replacement in finfish nutrition. DOI: 10.1111/j.1753-5131.2008.01001.x.

[8]. XUE M Y 等. Mechanism Analysis of Metabolic Fatty Liver on Largemouth Bass (Micropterus salmoides) Based on Integrated Lipidomics and Proteomics. DOI: 10.3390/metabo12080759.

[9]. ZHANG M 等. Genome-wide association analysis study on host resistance against theAeromonas veroniiof largemouth bassMicropterus salmoides. DOI: 10.1016/j.fsi.2024.110093.

[10]. ZHU X H 等. Pathogenicity of Aeromonas veronii Causing Mass Mortality of Largemouth Bass (Micropterus salmoides) and Its Induced Host Immune Response. DOI: 10.3390/microorganisms10112198.

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