我國目前仍有逾9000萬慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者，現有治療下功能性治愈仍然存在諸多挑戰。華山感染科團隊在大型真實世界隊列和隨機對照臨床研究中，明確了即便采用序貫聯合等優化策略和優勢人群選擇，核苷與干擾素等現有抗病毒治療實現功能性治愈的概率仍然有限，即使在嚴格篩選患者后，核苷停藥仍會有一定的病毒復發概率。團隊在前期工作中，HBV核酸原位雜交檢測（RNAscope）和免疫組化驗證，觀察到在長期NA抗病毒治療，或IFN足療程治療后，數量顯著減少但持續存在HBV RNA陽性細胞，這些細胞即為狡詐的乙肝病毒慢性感染后藏匿在肝臟內的“儲存庫”，是功能性治愈難以實現和停藥后復發的主要原因，其難以被藥物或免疫徹底清除的機制待進一步明確。

近日，復旦大學附屬華山醫院感染科張文宏教授、仇超教授團隊聯合多家單位，在肝病領域國際權威期刊Hepatology 上發表了一項題為"Host-viral interaction of HBV infection revealed by single-cell transcriptome jointly profiling the viral replication state"重磅研究。

該團隊自主研發了一項名為B-BEST 的基于單細胞測序的新技術，突破了傳統技術瓶頸，首次在單細胞水平上“看清”了乙肝病毒在肝細胞內的真實狀態，為乙肝功能性治愈提供了全新的視角。傳統檢測主要靠抽血或分析肝組織，只能看病毒mRNA或蛋白（如HBsAg、HBcAg），而且一次只能測一兩個指標，信息很粗糙，殘留“頑固”細胞的比例很少。所以無法明確病毒具體感染了哪些肝細胞、病毒這些“頑固”細胞里是活躍復制還是靜靜儲存，也不知道這些細胞怎樣影響肝臟炎癥病理損傷。這些問題一直困擾著科學家。

隨著單細胞測序發展，讓我們有望更精細地研究病毒和宿主的關系。然而，傳統單細胞測序方法中更適用于檢測人的信息，難以有效捕獲低拷貝的HBV序列，導致感染病毒的細胞檢出率低。打個比方，來源于人的細胞的核酸序列像海水一樣多，想抓到里面的病毒核酸，無異于大海撈針。

該團隊研發的B-BEST 技術，在常規“釣竿”上加了5個專門抓捕病毒的“自動魚鉤”，能高效捕捉到乙肝病毒的多個關鍵區域（S、X、pgRNA、rcDNA、cccDNA）。相比傳統方法，對病毒序列的檢測效率提高了100倍以上，解決了低豐度病毒核酸難以捕獲的難題；結合高通量單細胞技術，可以一次性捕獲并同時分析數萬個細胞，突破了關鍵技術瓶頸。

同時，該團隊還從單細胞水平精準呈現了HBV對宿主細胞的選擇性、HBV復制對宿主代謝機制的依賴、HBV感染后肝細胞的響應和清除作用、HBV的免疫逃逸等方面，描述了HBV感染過程中的宿主-病毒交互作用，為乙肝病毒持續感染和功能性治愈的機制提供了新的視角與思路。未來，隨著多組學技術和臨床抗病毒治療新藥的迭代，B-BEST將持續助力科研人員為終結乙肝威脅提供更精準的科學支撐和突破路徑。

本文轉載自 ：華山感染

本期編輯：木木